❶ 二抗显影原理
二抗显影原理是一种生物学技术,它可以用来检测和定位某种特定的蛋白质或其他生物分子在细胞或组织中的分布。它的基本原理是,利用一种特定的抗体与某种特定的抗原结合,以检测抗原的存在。抗体本身可以通过免疫细胞化学方法来检测,而抗原可以通过免疫细胞化学方法或其他技术来检测。抗体与抗原结合后,可以通过一种特定的染料或标记物来检测,从而实现对抗原的检测。二抗显影技术可以用来检测和定位某种特定的蛋白质或其他生物分子在细胞或组织中的分布,从而为进一步研究蛋白质或其他生物分子的功能提供重要的信息。
❷ 抗体检测是什么意思
1、抗体检测是包含较多范围,抗体是针对抗原所产生,如针对病毒的抗原,常见抗乙型肝炎抗体、乙型肝炎病毒表面抗原抗体、乙型肝炎病毒核心抗原抗体、乙型肝炎病毒e抗原抗体,以及巨细胞病毒抗体、EB病毒抗体等,均属于抗体检测。
2、对于细菌所产生的抗体,如抗链球菌溶血素O抗体、抗伤寒杆菌抗体、抗布氏杆菌抗体等,主要是为诊断与鉴别诊断,以及了解病情。而自身抗原产生的自身抗体,如抗核抗体、ENA抗体等,对于诊断自身免疫病较有意义。
3、此外,当注射疫苗以后需检测抗体,是为了解注射疫苗后是否产生抗体,如注射乙肝疫苗后是否有保护作用。抗体检测是综合性,应根据不同情况,从而进行相应抗体的检测。
❸ 抗体和抗原是什么意思
对于你的补充问题
对乙型肝炎的诊断,主要靠化验检查。常规检查有肝功能,包括血清胆红素(T-BiI)谷丙转氨酶(GPT)。乙肝表面抗(HBsAg)等。血清胆红素及谷丙转氨酶升高,均说明肝内有炎症。乙肝表面抗原阳性说明已感染了乙肝病毒。
如果乙肝表面抗原为阳性者,可进一步检查乙肝系列。它们分别为:(1)乙肝表面抗(HBsAg),(2)乙肝表面抗体(抗-HBs)。(3)e抗原(HBeAg).(4)e抗体(抗-HBe).(5)核心抗体(抗-HBc)。简单地讲;第(1)项代表感染。第(2)项代表抵抗力。第(3)项代表病毒复制。第(4)项须结合第(1)项分析;第(1)项阳性者第(4)代表病毒复制。第(1)项为阴性者,第(4)项阳性只能说明感染过乙肝把病毒已经痊愈。第(5)项阳性的临床意义与第(4)项大致相同。平时说的大三阳指第(1),(3),(5)项阳性,为急性期感染。平时说的小三阳指第(1),(4),(5)项阳性,多为慢性期感染。所谓的携带者,指第(1),(5)项阳性。乙肝患者痊愈后,多有第(2),(4),(5)项阳性或第(4),(5)项阳性或第(2),(4),(5)项单项阳性。
个别病人需做特殊检查,可检查HBV-DNA,PCR,以确定有无病毒复制。慢性患者,须查甲胎球蛋白(AFP),以排除肝硬化及肝肿瘤。除做化验检查外,肝病患者还应该做B型超声检查。
抗原(antigen, Ag)是一类能诱导免疫系统发生免疫应答,并能与免疫应答的产物(抗体或效应细胞)发生特异性结合的物质。抗原具有免疫原性和反应原性两种性质。
免疫原性是指抗原刺激机体后,机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应。
反应原性是指产生的抗体或致敏T淋巴细胞能与抗原进行特异性结合的免疫反应。
既具免疫原性又具反应原性的抗原称免疫原。某种物质之所以能成为一个良好的免疫原,是因为它有特异的化学结构,这就是抗原决定簇。抗原决定簇可以与相应的淋巴细胞表面的受体蛋白结合引起免疫应答。一个抗原决定簇只能激活一种淋巴细胞(对于B细胞)只刺激产生一种类型抗体。一个抗原可以有一个或多个抗原决定簇。抗原功能性决定簇的总数称抗原结合价。抗原决定簇少,抗体与抗原结合就少,往往就见不到反应。天然抗原或复杂的半抗原决定簇往往多达几十个,因此可以与很多抗体分子交互结合。
有些分子本身没有免疫原性,不能引起免疫反应,但是如果把它们和某些载体分子,如蛋白质分子结合起来就有了免疫原性,就能使动物对这一复合分子产生特异的抗体。这种本身无免疫原性,但有反应原性,一旦把它与载体结合就有了免疫原性的物质,就称半抗原或不完全抗原。如寡糖,类脂和一些简单的化学物质等。吗啡就是一种半抗原,把它与蛋白分子结合起来,就可以使动物体产生相应抗体,此抗体可作为检测是否吸毒的试剂。
抗原相对分子量一般都在10X103以上,而在4X103以下者一般无免疫原性。在一定相对分子量范围内,分子量大者免疫原性强,这是因为:
1、相对分子量大,表面抗原决定簇就多,而淋巴细胞要求一定数量抗原决定簇刺激才能活化;
2、大分子化学结构稳定,在水中呈胶体,不易被机体破坏或排除,这样在体内存留时间就长,有利于持续刺激淋巴细胞。核酸本身免疫原性很低,但只要有5个核苷酸与蛋白质分子载体连接,就能刺激机体产生抗体。
抗原可分外源性抗原和内源性抗原两类,前者如细菌、病毒、花粉、各种毒素以及小型动植物;后者主要为机体从未接触过的物质或构象发生改变的自身成分,如变性的IgG重链、晶状体物质、精子、脑组织等。
抗体是人或动物受抗原物质(如细菌或其毒素、病毒等)刺激后,由浆细胞合成和分泌的一种特异性蛋白质。抗体是人体抵抗感染的一种重要武器。19世纪末,德国科学家Behring发明了用含白喉抗毒素的动物血清注射给白喉患儿,使其治愈。此后医学家们用含有不同抗体的动物血清或人血清来治疗或预防多种传染病。由于Behring开创了抗体治疗传染病的方法,对防治传染病作出了卓越贡献,本世纪初荣获诺贝尔医学奖。但传统的人工生产抗体的方法是将抗原物质(如细菌或其毒素等)注射给动物(如马、羊等),使动物产生针对该抗原物质的抗体。人们抽取免疫动物的血液,分离出含抗体的血清。这种体内生产抗体的传统方法有许多缺点。例如所获得的抗体不纯,不能连续生产,动物饲养与管理工作繁重等,故长期以来医学家们一直在探索在试管内(即体外)生产抗体的方法, 1976年英国剑桥大学两位科学家Milstein和Koh1er将小鼠骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞杂交。小鼠骨髓瘤细胞能在体外无限增殖传代并能分泌无抗体活性的球蛋白;免疫小鼠脾细胞能产生针对某种抗原的抗体,但不能在体外无限增殖。将两者融合成一种杂交瘤细胞,后者继承了两个亲代细胞的特点,既可在体外无限增殖,又可产生针对某种抗原的抗休。一个杂交瘤细胞在体外不断增殖所形成的细胞集团,被称之为克隆。在同一克隆中所有的细胞产生相同的抗体,此抗体称之为单克隆抗体(简称McAb)。它是单一特异性的高纯度的抗体,可在体外连续大量生产。McAb在临床医学及基础医学领域发挥了巨大作用,给某些难治疾病的诊断、防治带来了新的希望。如针对某种肿瘤细胞的McAb与毒素、抗癌药物或放射性物质结合成复合物(医学上称为生物导弹),将此复合物注射到病人体内,可定向杀伤McAb所针对的肿瘤细胞,而对其它正常细胞则无作用,这是任何其它抗癌治疗方法办不到的。因此,单克隆抗体技术被誉为现代生物科学的一项革命性突破,是当今四大生物工程技术之一。由于Milstein和kohler的杰出贡献,1984年他俩共同获取了诺贝尔医学奖。
❹ 核酸抗体怎么检查 是怎么解释的
1、核酸检测的物质是病毒的核酸(可以理解为老百姓常说的遗传基因)。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸,来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”,即可证明患者体内有病毒存在。所以说,核酸检测阳性可以作为新型冠状病毒感染确诊的金标准。
2、抗体检测的物质是人体受病毒感染刺激而产生的特异性抗体。病毒进入人体一段时间后,会刺激人体产生IgM(免疫球蛋白M)或IgG(免疫球蛋白G),我们可以通过检测血清中的抗体,间接证明人体已感染新冠病毒,这就是抗体检测。
3、如果把人体被新冠病毒感染比喻为小偷入室盗窃,找到病毒核酸,相当于抓了小偷的现行。而找到了病毒的抗体,相当于找到了小偷留在作案现场的指纹或足迹等痕迹。
❺ western结果怎样统计分析
1、 一般分析是用方差分析、T检验。
2、统计分析是指运用统计方法及与分析对象有关的知识,从定量与定性的结合上进行的研究活动。它是继统计设计、统计调查、统计整理之后的一项十分重要的工作,是在前几个阶段工作的基础上通过分析从而达到对研究对象更为深刻的认识。它又是在一定的选题下,集分析方案的设计、资料的搜集和整理而展开的研究活动。系统、完善的资料是统计分析的必要条件。
运用统计方法、定量与定性的结合是统计分析的重要特征。随着统计方法的普及,不仅统计工作者可以搞统计分析,各行各业的工作者都可以运用统计方法进行统计分析。只将统计工作者参与的分析活动称为统计分析的说法严格说来是不正确的。提供高质量、准确而又及时的统计数据和高层次、有一定深度、广度的统计分析报告是统计分析的产品。从一定意义上讲,提供高水平的统计分析报告是统计数据经过深加工的最终产品。
❻ 医院化验的抗核抗体是检查什么疾病的
抗核抗体检查是自身免疫性疾病筛选试验。抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率,如系统性红斑狼疮(SLE,95%~100%)、类风湿性关节炎(RA,10%~20%)、混合性结缔组织病(MCTD,80%~100%)、干燥综合征(SjS,10%~40%)、全身性硬皮病(85%~90%)、狼疮性肝炎(95%~100%)、原发性胆汁性肝硬化(95%~100%)等,但经皮质激素治疗后,阳性率可降低。抗核抗体在类风湿患者中约有20%~50%IgG型ANA呈阳性,小儿类风湿ANA的阳性率约19%~35%,伴发虹膜睫状体炎者阳性率高(50%~90%),故ANA阳性预示类风湿有发生慢性睫状体炎的可能。已发现75%类风湿患者有多形核白细胞的特异性ANA或抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)可使白细胞核受到破坏。
一种自身免疫病可检测出多种自身抗体,检出一种抗核抗体又可涉及多种相关的自身免疫病,因此临床医师往往需要参考多项免疫指标,结合临床表现和其他辅助检查综合分析作出诊断。
❼ 急切求解WB,IHC的意思!
(一)WB
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。
一、原理
与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
二、试剂准备
1、SDS-PAGE试剂:见电泳实验。
2、匀浆缓冲液:1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml;10%SDS 6.0ml;β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。
3、转膜缓冲液:甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g;甲醇200ml;加ddH2O定容至1000ml。
4、0.01M PBS(pH7.4):NaCl 8.0g;KCl 0.2g;Na2HPO4 1.44g;KH2PO4 0.24g;加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液:考马斯亮兰 0.2g;甲醇80ml;乙酸2ml;ddH2O118 ml。包被液(5%脱脂奶粉,现配):脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。
6、显色液:DAB 6.0mg;0.01M PBS 10.0ml;硫酸镍胺 0.1ml;H202 1.0μl。
三、操作步骤
(一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。
(二)电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。
(三)转移:(半干式转移)
1、电泳结束后将胶条割至合适大小,用转膜缓冲液平衡,5min×3次。
2、膜处理:预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜,浸入转膜缓冲液中10min。
3、转膜:转膜装置从下至上依次按阳极碳板、24层滤纸、NC膜、凝胶、24层滤纸、阴极碳板的顺序放好,滤纸、凝胶、NC膜精确对齐,每一步去除气泡,上压500g重物,将碳板上多余的液体吸干。接通电源,恒流1mA/cm2,转移1.5hr。转移结束后,断开电源将膜取出,割取待测膜条做免疫印迹。将有蛋白标准的条带染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脱色,至背景清晰,然后用双蒸水洗,风干夹于两层滤纸中保存,留与显色结果作对比。
(四)免疫反应:
1、用0.01M PBS洗膜,5min ×3次。
2、加入包被液,平稳摇动,室温2hr。
3、弃包被液,用0.01M PBS洗膜,5min×3次。
4、加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释,液体必须覆盖膜的全部),4℃ 放置12hr以上。阴性对照,以1%BSA取代一抗,其余步骤与实验组相同。
5、弃一抗和1%BSA,用0.01M PBS分别洗膜,5min×4次。
6、加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释),平稳摇动,室温2hr。
7、弃二抗,用0.01M PBS洗膜,5min×4次。
8、加入显色液,避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。
四、注意事项
1、一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。
2、显色液必须新鲜配置使用,最后加入H2O2。
3、DAB有致癌的潜在可能,操作时要小心仔细。
(二)IHC
免疫组织化学 IHC
免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术,50年代以后逐渐发展建立起高度敏感,且更为实用的免疫酶技术。
免疫组织化学的全过程包括:1.抗原的提取与纯化;2.免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体以及抗体的纯化;3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体;4.标本的制备;5.免疫细胞化学反应以及呈色反应;6.观察结果。
免疫组化基础知识
免疫组织化学的概念:
免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学。
免疫组化实验所用的抗体有哪些?
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些?
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
石蜡切片为什么要做抗原修复?有哪些方法?
石蜡切片标本均用甲醛固定,使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇,同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时,需要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态。
常用的抗原修复方法有微波修复法,高压加热法,酶消化法,水煮加热法等,常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。
免疫组化常用的染色方法有哪些?
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。
抗体交叉反应的原因:
指抗体除与其相应的抗原发生特异性反应外还与其它抗原发生反应。产生的原因有以下几个方面:
1. 抗原特异性指用于免疫动物的抗原性物质中含有多种抗原分子,它引起动物产生针对多种抗原分子特异性的相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同的抗原分子,必将与上述多特异性的抗血清发生交叉反应。
2. 共同决定簇即两种抗原分子中都含有相同的抗原决定簇。
3. 决定簇相似,两种不同的抗原决定簇,如果结构大致相同,由于空间构象关系,某一决定簇的相应抗体可以与大致相同的决定簇发生交叉反应。当然抗原一抗体之间构象相似时的结合力小于吻合时的结合力。
多抗和单抗特性比较:
1.均一性。一种单抗中,每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同,只有一种Ig亚类。即单抗是一种纯度很高的均一抗体。而从不同动物,不同时期所得到的多抗,各有不同的化学组成。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。
2. 稳定性。单抗的稳定较差,对PH变化敏感,对热不稳定,提纯过程中易变性,而多抗的稳定性则较好。
3. 特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇,所以用它进行血清学反应时,特异性强,敏感性高,一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合,所以特异性较差,较易引起交叉反应。
4.重复性。单抗的重复性好,而多抗每批都不一样。
5. 沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀,而单抗只与抗原结合产生二聚体,不能直接形成抗原抗体沉淀物。
抗体的保存:
抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如储存的抗体中蛋白浓度很低(10-100mg/L),就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附,隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下,以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下,并避免反复冻融。冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻,应绝对避免用高温快速解冻。被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果,应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。为防止细菌污染,可于抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经真空冷冻干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀释后的单抗应加入0.1%叠氮钠浓度。大多数稀释抗体可进行冷冻保存,少数抗体可能会丢失抗原活性。大多数单抗,只要蛋白浓度适当,可在4℃下保存数月。
希望你能满意 谢谢!!!o(∩_∩)o... ^_^