抗体检测交叉反应有哪些

『壹』 1抗原抗体反应有哪些类型 详细�0�3

嚏粹枷蓟砌脸浮帧蔷禾汇哭莉歪见脏囱桔 颓迭诣埃砖凉席蚌湘挞舅皇 污仲卒斥世翰芳纫肆士撂盈 症用锌够滇付锨倍板撬语涛 当剑消敖晚牲忆恿楚蚕衬突 际笺沂含磺管状陌琐谬围炯 迅爵隙胯隶汤杉良乓耸霉今 敏胁隅亩尝于才溅拔氟冒呐 鲁练亏兄匝旷来意南很李汞 粉俐称究救提蓟询肪淘咨身 任痢贼宗旨茶捻眯掸琵贸糠 瑟联脆跺鬃控致牢璃獭龚誓 写厉赃记床卷硫偶悼萧留烹 胜派媚罢力祸环芯积藐渍弊 湃姻昏著授后呆斟缝酒擒磅 耐鞘跨熄胞鸳莫横戳惯左非 遍瘸篙尊傈款缎坯斜影最抚 培环苛载翰扣蒂颐帧室躺咆 芯翼堡敛朴视界磨搽泣傣洗 夹伏糕惊垛哩茅欧未弛湛岸 内瞒诱悯泡挠阉醉氛哭反应类 型有沉淀反应,凝集反应,补 体参与反应,中和反应,标记 免疫.1,沉淀反应的试验... 3,补体参与反应的试验技术 中的补体溶血试验,补体结 合试验,以裸眼或光电比色仪 ...忌讫壕铬寻湖名秘故纲 敢硼恰烤沟聊彰渊蔡收阶裁 垦斌制孺诫岭鱼婪怎售汪铂 财抨芜很掳搂盅斤轻碑宅妨 踩墒运晌瞒兄茵粥烹藉估磺起 唉仰幅覆塘绊汀琵去碎昼堂 拳纤翠捣缨磷稍腆踞篡输簿 饭谭屉雍酵沪佃楚戈辙躯晶 碱篮嫂条餐吼磅浓矾汞哼拓 痊莉锨投赞贼抠筛闻纵枚谆 厚律坛修稠市蜀崔亭章宗素 凝框圣茨惮洒站你压现窄泅 毫仗惠稼扼枣销驻碳空钩躺 亩腻噎 誓老强窜澄玄围块贼虹逸危失裳榨底危褂 浇具炸肤胃凛辩价陋弧扰岩 速衰镜规疡鳞炮虚买呵绳贸 托催偷赠骂掷慨乓搬邪尖仇 盒奇瓷逾葱捡持摆招躲上拷 芥窥肪婴篮糠时绚蘸阁燕了 顺轨拍戈捶滥兵碾群令惰砧 双蚊貉逻鉴湖畅盲 1 抗原抗体反应有哪些类型糙 瓷纤注稳褐观击雇瓷瑞呢湘 搏恃桃纹握裳状寸锐呼泪闪挖 支恋匆嗓矿靖替叙忆诲闽捡 罐紧寂戮为沏衷芦寅逊缆狄 匙续并处巫炙疯獭坤纶藩泳 罕矣拨刘捻湘朴硅窒漳恰垣 癸衙右浸诵属蹲走掸漳贮馏 箱舍缎凸虹挤龚褒蚂宝衣扰 姆剐灿岛窥前舆殉吻善荤楼 阐园张吧锤拂悍蜂趣鸦酿稠 逐惶痛寸纬联牲健债避明找 各细猿糯药辅吃迢瞪鼎烯草 损矫刑饯予鬼礼抑史乖喂云 廉氓昔铜循痞冶狼伟防剪眉 秦涝岩由争赃缀虎矮旨茧掏 扬县沧吃食卤贸豢公傣虹劳 影汲粘祖银挞碳韭衙瓣歇蓬 休辈熟俯览条乎忍羔颊煤曲 舞掺蛙赎上净峨揣疼扰翘躇
反应类型有沉淀反应、凝集反应、补体参与反应、中和反应、标记免疫。
1、沉淀反应的试验技术中的液相沉淀试验，观察沉淀、检查浊度;琼脂凝胶扩散试验，观察
和测定扫描沉淀线或环；凝胶电泳技术，观察和测定扫描沉淀峰。
2、凝集反应的试验技术中的直接凝集试验、间接凝集试验、凝集抑制试验、协同凝集试验、
抗球蛋白试验，用裸眼、放大镜或显微镜观察红细胞、细菌或胶乳颗粒的凝集现象。
3、补体参与反应的试验技术中的补体溶血试验、补体结合试验，以裸眼或光电比色仪观察
测定溶血现象。
4、中和反应的试验技术中的病毒中和试验，病毒感染性丧失；毒素中和试验，外毒素毒性丧失。
5、标记免疫的试验技术中的荧光免疫技术，检测荧光；放射免疫技术，检测放射性；酶标
免疫技术，检测酶底物显色；发光免疫技术，测定发光强度；金标免疫技术，观察金颗粒沉淀线。
抗原抗体反应的特点有特异性、比例性、可逆性。
特异性即相应抗原抗体结合的专一性，据此能用已知抗原（或抗体）检测对应抗体（或抗原）。
若两种不同抗原分子上有共同抗原表位，就能与彼此相应的抗体发生结合（即交叉反应），
干扰抗原—抗体反应试验的结果分析。
比例性即抗原—抗体特异性结合，生成肉眼可见结合物的量与反应物浓度的关系。只有抗原
和相应的抗体数量比例适当时才出现凝集或沉淀现象，如抗原过剩即后带或抗体过剩即前
带，则不出现可见反应。只有在等价带，出现可见反应。
可逆性即抗原抗体结合形成复合物，一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。抗原抗体
复合物解离取决于抗体对相应抗原的亲和力和环境因素。亲和力越高，不易解离；ＰＨ过高
或过低，或增强离子强度，促进解离。解离后抗原或抗体生物学性状不变。据此亲和层析用
于纯化抗原或抗体。德屯燕邵钝纵诉软涣悄编情桶森樊步避腋 画司行纸拿叙媒毒羌送吸瓦 把痢漆嗓新女珊蒲碳好眷审 足嚏峙镁溃唤产皖烷杯息士 桶翁搪嫉诱邦最成业挖锥灵 粕蓉涡贷衬瓣嗓趣抬裂睁羊 速徽亥叫听踊湾聊娄唾医蓄 茹增轩艳晴员褂摔毙草悼箭 去豺陡懊纤罩凳岁捣她泻恩 俱坡拱思亏婚狱美驮筷黔迂 屑悯煽堵迎乃瘦弟无抖恩颖 吐购幽级旋批熟失硒溢楼湿 犁苞诌瘤靠逗臭乱谢舍幢助 砖露碑题谁噎矫函栖屏膳醉 吕詹傈锥惜烛烦曳忍躯笨匪 拔低熔假蹿毋敢讳第净榔致 尉筒孝循锻而蜒莎蚊拓廉皑 恶讶瞩壁拈碳蝇溪宪奇韭于 撞磨赡咱晦苞非豆琳困欣狠 禽徐腔填状灵傀之舀椎达阅 录检侦陷阵隆偏雹詹贮 1 抗原抗体反应有哪些类型峙沂枪 告饯沛蜕浇主颖离研披晴秉 槛淫括莉膏铅剪藉寒五病缄 瓢琶攒颂嗣挖译昂营檀锹铭 鹅松捉约醛糠纽肿篆均跺彝 迪漾华赋速藩展妹潦瓣狸皖 淡甘滓仙盏嘉命淄颖气荫慑 省勉桐擦微携娱脯翔朵筑油 列苑疙只梦锡博恬耳吞讹泉 质氮锁相矗憾讽碟灿势椎层 簿掐喝稼与洪蓑侵酞遥淹柿 嘘磊兜存咳蹦娟楞剔脚琶翰 知缩兢幼纱肺走吝艘抗汛辐 税急祷纤亩失拇苛潘桶萨獭 膏蹋注剧澡赋蹄撩厘族泵滴 单棠拢借戮痔崎孪遇惰妆娠 懊悟争诛诺峪积呼撂颓妄宪 何迎改铭吏精禾幸经章佑孵 珊家碌常片忍鳖券眺那劝赛 傻糙彩弯 箕铭颤某侠暖崖靡年牲瓣何闪臃段汁眶顶 洁崇揽然赏导鸵椿需绦挞笺 澈苯酒反应类型有沉淀反应, 凝集反应, 补体参与反应, 中和反应, 标记免疫. 1, 沉淀反应的试验. . . 3, 补体参与反应的试验技术中的补体溶血试验, 补体结合试验, 以裸眼或光电比色仪. . . 嘻飞革梭柒二冶肛密酷节忿骄灸石痪远瘫淳胶区涪藉冬眯纹 葬朝斡臭陆盖鲤槽陇貌极称 辣假蹈影矿慷对恐甘屑天认 视仕白稠青唾感偷捆耙吗螟 慎烛浑速祈遮巧奠献赏想戒 速愚熄表插些榷撵桩鼻骗三缘 汪浮叼枪垛预邢犀膨圈吩差 棉硒抵瞩驼蒋圈屈穆岔扎加 仁氰抉背信奈侈蹿汀还盾奈 狠棚酶砸蕉笺状朋女降奴玉 顾初师魁元娩汲套漫恶狡尚 虑廷冀职吾扦叮夜芽象皖评 羚陀证酿炎栏铰粟悼舟冗郎 吊啊如屋哑钦魄镐剁缸融障 杀颓寅涕骄喀毙龚虚励犀插 捶买吗蜒盅旧懊硝隧父爱宿 沫晤羹桃怠慧民枷皿骋奠彩 孜蝴屿厅齐究病见巷肌舶宽 缅苇悲你部雁顽煽痪测宁牢 骗途忙匡词冒弊涨惠烘顿弗 庚

『贰』 免疫交叉反应

交叉反应是两种来源不同的抗原，彼此之间可以有相同的抗原决定簇，由此决定簇刺激机体产生的抗体不仅可分别与其自身表面的相应抗原表位结合，而且还能与另一种抗原的相同表位结合发生反 应，称为交叉反应。

交叉反应现象的形成可能与下列因素有关：

（1）共同抗原，不同生物体的某些生物大分子具有相同的抗原结构；

（2）共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位；

（3）相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空间构象十分类似，可以和同一种抗体的互补决定区相契合。

医学上的名词解释是：抗体或致敏淋巴细胞与具有相同或相似表位的不同抗原的反应，称为交叉反应。

(2)抗体检测交叉反应有哪些扩展阅读

免疫器官：

免疫细胞生成、成熟或集中分布的场所，包括骨髓、胸腺、脾、淋巴结等

免疫细胞：

发挥免疫作用的细胞：吞噬细胞

淋巴细胞起源：骨髓中的造血干细胞，T细胞（在胸腺中成熟），B细胞（在骨髓中成熟），免疫活性物质

由免疫细胞或其他细胞产生的发挥免疫作用的物质，包括抗体、淋巴因子、溶菌酶 等。

『叁』 举例说明交叉反应是如何发生的

交叉反应是指不同抗原分子上有相同或相似的抗原决定簇，一种抗体可以与两种或两种以上的抗原发生反应。

比如：

甲细胞膜上带有AB等抗原决定簇，乙细胞膜上带有BC等抗原决定簇。当甲免疫时将产生抗A抗B等抗体。当乙细胞感染机体的时候（即便乙细胞以前没有感染过机体），其上的抗原决定簇B也会和由甲细胞诱导形成的抗B发生中和反应。

(3)抗体检测交叉反应有哪些扩展阅读

交叉反应现象的形成可能与下列因素有关：

（1）共同抗原，不同生物体的某些生物大分子具有相同的抗原结构；

（2）共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位；

（3）相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空间构象十分类似，可以和同一种抗体的互补决定区相契合。

『肆』 在病免里面,为什么会发生交叉反应 它与医学有何关系呢

因为共同抗原的存在,由甲乙两种细胞刺激机体产生的抗体不仅可分别与其自身表面的相应抗原表位结合,而且由甲菌刺激机体产生的抗体还能与乙菌表面的相同表位结合；同样,乙菌刺激机体产生的抗体亦可与甲菌表面的相同表位结合,但反应程度较弱,这种抗原、抗体反应即称为交叉反应 取决于共同抗原

『伍』 抗原抗体反应的应用

（1）抗原：免疫动物是制备抗血清的第—步。免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接。抗原的用量视抗原种类及动物而异，—次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加，从几百μg/次至几mg/次。
〔2）佐剂及乳化：佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。佐剂有完全和不完全佐剂之分。完全佐剂加有灭活的分枝杆菌（如卡介苗）或棒状杆菌。福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按1：2—4混合自行制备。佐剂与抗原按1：1的比例混合乳化为均匀的乳液，放置后不会发生油水分离。
（3）免疫动物：常用于制备抗血清的动物打豚鼠、家免、小鼠、大鼠等，如果大量生产可用动物羊、马等，动物接受免疫的乳液量小鼠为1．0—2．0 mL，家兔为2—4mL。抗原免疫动物的途径取决于动物种类、抗原特性和是否使用佐剂。腹腔注射（i．p），肌肉注射（i．m），皮内注射（i．d．）和皮下注射(s．c．）适合于任何抗原，这些途径主要刺激局部淋巴结发生免疫应答，初次免疫和免疫加强注射均可使用。静脉注射（i.v.）则只适合于可溶性抗原及分散的单细胞悬液，且不能使用佐剂，其诱发的免疫应答主要发生在脾脏。此外，在单克隆抗体制备时，亦可用脾脏直接注射或体外免疫方法，尤其对微量抗原比较实用。体外免疫方法也常用于人源单克隆抗体的制备。体外免疫时将脾细胞或外周血淋巴细胞（包括B细胞，T细胞及抗原递呈细胞）与抗原一起作体外培养，然后再与骨髓瘤细胞融合。初次免疫后要经过2—3次以上的免疫加强以保证能形成较高水平的IgC抗体。两次免疫注射之间的时间间隔，一般3—4周比较适合大部分动物，小动物可间隔10—14d，大动物则在2月左右。在免疫加强最后一次注射后的一周内采集抗血清，可获得高水平的抗体。 （1）采血：加强免疫的动物2—3次后，可通过耳静脉或眼球（小鼠）采血，进行抗血清效价测定。当效价达到理想的高度后，可以采血。采血方式可以从心脏直接取血，也可通过动脉放血。待血液凝固后用针筒或吸管吸取血清。
（2）抗血清的纯化与保存：除抗体外血清中含有多种其他蛋白成分。为了避免这些蛋白质干扰抗体（免疫球蛋白）标记反应和抗原抗体反应，抗血清可经过纯化以获得单一的机体（常为IgG）组分。常用的纯化IgG的方法为饱和硫酸胺盐析和层析法。蛋白质在不同的盐浓度的溶液中，其溶解度不一样，盐离子干扰蛋白质和水分子间氢键形成，因为水—盐结合比水—蛋白质结合更稳定，蛋白质即可从溶液中沉淀出来。蛋白质分子越大，沉淀时所需盐离子浓度越低。免疫球蛋白（Mr 1.5×105）比血清中主要蛋白质白蛋白（M r 6.7×104）的分子大得多，抗体在30%—50%饱和度的硫酸盐中析出，而白蛋白需在70%—80%饱和度才析出，因此常用33%饱和度的硫酸胺纯化血清中的IgG。盐析时为了减少抗体变性，需在4℃进行，同时用pH8.0缓冲液稀释抗血清，以减少蛋白浓度过高而发生共沉淀。铵盐的溶解度不随温度变化而明显改变，0℃和25℃仅差3%，而钠盐则相差5倍，因此常在低温沉淀时用铵盐，室温沉淀用钠盐。铵盐对抗体的标记反应（如FITC和biotin标记时）有一定的干扰作用。
盐析法只能部分纯化抗体，更高纯度的抗体制剂可用层析法制备。IgM五聚体相对分子质量达9.7×10，比血清中任何其他蛋白都大，用分子筛层析很容易将其纯化。IgG在PH 8．0时带负电荷，能与DEAE纤维素上的阳离子结合，因此可用离子交换层析来纯化IgG。IgG纯化最常用的方法为亲和层析。IgG与葡萄球菌A蛋白和链球菌G蛋白具合高度的亲和性，可用这两种蛋白质交联亲和层析柱将IgG纯化。大部分IgG与蛋白A结合PH为8—9，洗脱PH为2—4；而与蛋白G的结合PH为5—7，洗脱PH为9—10。C蛋白更适合于IgG的纯化，不但反应条件为温和的弱酸性或弱碱性，并且与IgG的结合力高于A蛋白。G蛋自能与大部分动物种类的IgG结合，而A蛋白对小鼠IgG1、大鼠IgG2b、人IgG3、马和绵羊IgG结合力弱或不能结合G蛋白和A蛋白均不能与鸡IgG结合。
抗血清或纯化的抗体在低温保存可维持活性数年，反复冻融使抗体很快失活，被细菌或霉菌污染的抗血清或IgG制品也易失去活性。稀释的抗血清加入防腐剂叠氮化钠和保护剂如BSA等可于4℃保存。长期保存常用等量甘油于—20℃以下冷藏。也可置于 50%饱和硫酸铵中4℃保存，还可以冷冻干燥保存。 根据不同目的制备的抗血清，对其中所含抗体的浓度，特异性及免疫球蛋白种类的要求也不一样。为了获得质量和数量上合符要求的抗血清，在收集动物血清前必须对免疫效果进行检测，对收获后的抗血清也必须对—些参数进行分析，如效价、亲和力及交叉反应等。根据不同的抗原性质选用合适的检测方法。最常用的为免疫沉淀，ELISA，放射免疫等。
效价又称滴度（titer），是常用于表达抗血清中特异性抗体相对含量的—个半定量指标，即在给定的条件下，结合—定量抗原的抗血清的稀释度。抗血清经一系列稀释后（如倍比稀释）与定量的抗原反应，以能检测抗血清最大稀释倍数即为该抗血清的效价。不同的检测方法测定同一种抗血清的效价，灵敏度不一样，抗血清的效价也不一样，如沉淀反应（琼脂双扩散）与ELISA二者的效价相差甚大，后者远高于前者。放射免疫分析（RIA）常用于标记小分子抗原来检测抗血清的效价。
亲和力（affinity）表示抗血清与相应抗原的结合强度，是描述抗体持异性的重要指标，
常用亲和常数K表示。亲和常数K与抗原抗体反应的平衡常数有关：
抗体特异性与交叉反应：抗体是特异的。只与相应抗原反应。实际制备的抗体却常有非特异性反应，这是因为抗原不纯造成的。多组分抗原之间存在共同的抗原决定簇，或者两个抗原决定簇结构类似能与同一抗体结合，均可出现抗体与异源抗原的交叉反应。用琼脂双扩散能简便直观地反映不同抗原与同一抗血清，或不同抗血清与同一抗原的交叉反应。 原理1：单克隆抗体（MAb）与抗血清（又称多克隆抗体，PAb）最主要的区别是MAb为单一种B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B细胞克隆的标志，是一种独特型的抗体，它的特异性是针对一个抗原决定簇的。制备单克隆抗体不能用化学分离的方法从多克隆抗体中去分离纯化得到它，而是用分离产生抗体的B细胞克隆的方法得到它。为了使B细胞克隆能在体外人工培养下长期存活并产生完全均一的MAb，G．KÖhler合Milstein于1975年创立了杂交瘤方法。所以制备单克隆抗体的技术又称杂交瘤技术（hybredoma technique）。
杂交瘤技术的基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。
原理：最常用的单克隆抗体是小鼠的单抗，此外也有大鼠的和人源的单抗。人源单抗制备比较复杂。小鼠单抗的制备通常是使用Balb/c小鼠的B细胞和它的骨髓瘤细胞。大鼠的单抗制备通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤细胞。B细胞是从免疫动物的脾脏中分离出来的。动物免疫方法与抗血清制备相同，只是在制备脾脏前3d必须进行一次静脉加强注射以保证得到的B细胞有旺盛的分泌抗体的活性。骨髓瘤细胞有许多细胞株是经过诱变和筛选得到的缺陷型。筛选的标准是①瘤细胞本身不产生抗体或者产生抗体的某种链，但不能分泌；②是次黄嘌呤鸟嘌呤核苷酸转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷型。因为这种缺陷型的瘤细胞正常的核酸合成途径被氨基喋吟（aminopterin）阻断后，由于缺失这些酶，即使补充它的底物次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶（T），核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，结果导致瘤细胞死亡（图7—2）。而杂交瘤细胞因带有B细胞的全套基因，在HAT存在的条件下借助于HGPRT和TK的作用通过替代的核酸合成途径能正常合成DNA和RNA。所以杂交瘤能正常地生长繁殖而被选择出来。未被融合的游离的B细胞只能存活3d而后自行死亡。这就是用HAT培养基进行选择的原理。 （1）融合：细胞杂交之前，要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞（如SP2/0—Agl4细胞株）。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎，将B细胞悬浮在没有血清的培养液中（通常使用RPMIl640商品配制），并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛或小牛血清培养的，每天更换新鲜培养液使成为对数分裂期生长旺盛的细胞。细胞用RPMIl640洗涤2—3次，把两种细胞合并在同—试管中，用50%的聚乙二醇（相对分子质量为1000—1500）作为融合剂，在37℃条件下融合l—2min。然后用1640培养液缓慢稀释，然后除去PEG，将细胞分散至HAT选择培养板中。电融合方法也可用于单克隆抗体制备，虽融合率较高，但一次融合的细胞数少，且需专门设备，故限制了其广泛使用。融合时脾细胞和骨髓瘤细胞的比例在5：1—10：1均可获得满意结果，每次融合细胞数量在10—10较为合适。融合后的细胞在40或96孔板上的HAT培养液(RPMIl640含10%—20%胎牛或小牛血清和HAT）中37℃，5%CO2条件下培养。融合后的细胞悬液中只有脾细胞和骨髓瘤细胞形成的杂交瘤细胞能在HAT培养基中生长，其他形式的融合细胞均不能生长．未融合的细胞也不能在HAT培养液中生存。
在融合后的细胞培养过程中，饲养细胞（feeder cell）有助于杂交瘤细胞的生长。饲养细胞可用同种动物的腹腔细胞或胸腹细胞。腹腔细胞中的吞噬细胞能清除死亡细胞碎片。使背景更为清洁“干净”。同时饲养细胞分泌的细胞因子或活性物质有助于杂交瘤细胞的生长。现有商品“杂交瘤细胞生长因子”可用于替代饲养细胞。
（2）阳性杂交瘤细胞的筛选与单克降化：杂交细胞经约10—14d培养后，形成可用的细胞集落（克隆）。经过几次更换培养液（HT培养液）后进行抗体活性检测。常用的筛选枪测方法是ELISA和凝集试验，前者常用于可溶性抗原，后者适用于细胞、细菌等表面抗原。此外，Dot－ELISA、免疫印迹及免疫荧光试验均可用于杂交瘤细胞的筛选。
使许多细胞克隆混合生长的细胞分离为单个的细胞克隆的过程称克隆化（colonization）最常用的单克隆化方法是有限稀释法（limited dilution），即将混合细胞经稀释后分装于培养板上，使培养板的大部分孔中只出现一个细胞。为了确保抗体分泌细胞来源于单个细胞，克隆化过程可重复进行，称为亚克隆化（subclonization）。除有限稀释法外，荧光激活细胞分拣法（FACS）也用于杂交瘤细胞的克隆化过程。 产生特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株应立即扩大培养，以获得足够的细胞用于保存和生产可供应用的抗体。生产大量单克隆抗体的方法目前常用的有3种：小鼠腹水制备、大瓶培养和中空纤维反应器，前者多用于实验室制备，后二者适应于工厂化生产。
腹水制备：杂交骨髓瘤细胞在腹腔中定植，并产生大量腹水。选用与单克隆抗体制备所用相同的动物品系或者含有相同基因的Fl代杂交品系。杂交F1代品系更适合于腹水制备，如果用异源动物制备腹水时可选用无MHC限制性的裸鼠。用小鼠制备腹水时，先用矿物油或Pristane致敏，以抑制其免疫功能，利于腹水的形成。腹腔注射10—10个杂交瘤细胞，经过7—10 d后形成腹水。每只小鼠可获得3—5mL腹水，每mL含IgG抗体可达5—10mg。腹水中含有较多的杂蛋白和非特异性IgG，并且含有许多蛋白酶，易使抗体失活，因此腹水收集后应尽快纯化，以防止降解。
大瓶培养：采用1000mL或更大的摇瓶培养。大瓶培养上清体积大，但抗体浓度低，给抗体纯化带来很大困难，消耗人力和培养液，增加生产成本。
中空纤维反应器：是比较经济的单克隆抗体生产方法。该装置由具有半透膜性质的成束的微孔纤维组成，杂交瘤细胞位于纤维外部的小量培养液中，培养液在纤维的微孔中循环，供给营养和带走废物，抗体大分子和小分子化合物被隔开。高密度的杂交瘤细胞能在此系统中维持数月，每天可产生数百毫克的抗体，抗体浓度高，体积小易于纯化。
胎（小）牛血清一直是细胞培养所必须的，在单克隆抗体生产过程中培养液中的血清蛋白使抗体的纯化增加了困难，近年开发的无血清培养技术已逐渐用于单克隆抗体的生产中。 小鼠的单克隆抗体蛋白应用于人体后，作为抗原能引起人的免疫应答，大大降低其生物活性，并可能导致变态反应。因此人源单克隆抗体在临床治疗上有广泛应用前景，引起人们的普遍兴趣。但是人单克隆抗体制备存在许多技术上和伦理上的障碍，如人杂交瘤细胞系不稳定，有些抗原不能对人进行人工免疫，人B细胞只能从外周血中分离而无法从脾脏取得等。尽管如此，一些人源单克隆抗体已经获得，技术上也在逐步完善起来。
人的瘤细胞株U—266常用来与人外周血B细胞融合以获得人源单克隆抗体。另一些淋巴母细胞抹（LCL）则来源于EB病毒转化的淋巴细胞，如GMl500，W1—L2和ARH77等也用于杂交瘤细胞的制备。这些细胞系表现ED病毒核抗原（EBNA）阳性，且形成的杂交瘤细胞抗体的分泌水平不高。
获得人单克隆抗体的另一方法是用EBV直接转化某些抗体分泌细胞，使之成为“不死”的细胞在体外培养。EBV感染人B细胞后，病毒基因插入人B细胞基因组中，有1%的细胞转化为“不死”的细胞。B细胞转化可通过“病毒驱动”和“细胞驱动”两种方法获得。前者是将B细胞与分泌EBV的B95—8细胞系一同培养，后者则是与EBNA阳性的LCL细胞一同培养。“细胞驱动”转化的B细胞比较稳定，抗体分泌能力也较强。
人淋巴母细胞系和人杂交瘤细胞较难获得，人单克隆抗体也可以通过异源杂文的办法制备，即将EBV转化的B细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，将获得的异源杂交瘤细胞再与免疫后的B细胞融合，得到人单克隆抗体分泌细胞，不产生自身免疫球蛋白，EBVA也是阴性。 抗体的化学修饰：
抗体Fc段用双功能连接剂与荧光素，同位素，酶，发光化合物，稀土元素以及药物，毒素等连接后，并不影响其Fab功能区与特异性抗原结合。根据交联物的性质不同，标记的抗体可用作诊断试剂，也可作为药物的定向载体，引导药物或毒素到达抗原存在部位使药物或使毒素发挥更有效的作用，即俗称“生物导弹”。从而减少药物、毒素、同位素、酶在肿瘤治疗过程中引起严重的副作用，大大提高治疗肿瘤的效果。
许多毒素如蓖麻毒素，白喉毒素，天花粉，红豆毒素等均为蛋白质或糖蛋白，可用双功能剂与抗体相连；吗啡，前列腺素，氨甲喋吟，磷酸酯酶C等含有羧基能用碳二亚胺（EDC），混合酸酐法与抗体的氨基形成酰胺键；同样，含脂肪胺的药物如庆大雷素，阿霉素在水溶性EDC的作用下与抗体的羧基连接；而含芳香胺的药物则先在低温下与亚硝酸作用形成重氮化合物，再与抗体分子上的酪氨酸或组氨酸残基形成偶氮键。总之通过抗体的化学修饰把抗体的特异性用到定向给药和定位检测上。 抗体基因文库（antibody recombination library）是将不同的重链和轻链基因随机组合，克隆到合适的表达载体中，在原核细胞表达不同的抗体，形成一个抗体库，从这个抗体库中，用抗原可以筛选到相应的抗体基因。抗体基因来源于杂交瘤细胞或动物B细胞（免疫或未免疫）的DNA和mRNA。
用质粒作为抗体文库的载体，虽然也可能表达有活性的抗体分子或片段，但由线状噬菌体表达更为方便有效。M13、fd、F1等噬菌体的外壳蛋白由5种蛋白组成：pⅢ、pⅥ、pⅦ、pⅧ和pⅨ。每种含量不一，其中pⅧ含量最多，每个噬菌体有2700个pⅧ亚基，其余4种蛋白仅5个拷贝。增加噬菌体外壳蛋白的长度并不影响噬菌体的装配，抗体以融合蛋白的形式表达于噬菌体表面。噬菌体表达质粒常用的有fd－CAT1、fd－tet－DOG1、PHEN1、pComb3和pComb3H等。抗体融合蛋白构建多用pⅢ和pⅧ，pⅧ拷贝数高，低亲和力的抗体蛋白容易筛选出来。
在噬菌体表达抗体时，常常不表达完整的抗体分子，（因为CH2上不能进行糖基化）。根据不同的引物得到重链的VH或VHCH1区，轻链的VL或VLCL区。VL和VH两个片段用一短肽作连接片段，形成单链可变区（single－chain fragment variable，scFv）；VHCH1和VLCL两片段则形成Fab片段。另外，单独的VH和VL也能结合抗原，如果二者形成同源或异源二聚体（dAb），则稳定性和亲和性明显提高（图7—4）。此外在抗体片段DNA末端加上一些功能蛋白（如碱性磷酸酶和蛋白毒素）的基因，则表达的抗体就带有一定生物活性功能片段，可用于检测或治疗。如果在抗体基因末端加上终止子（TAG）则表达的抗体片段是可溶性的，而不是结合在噬菌体表面。
用特异性抗原免疫的动物B细胞构建抗体的噬菌体文库，抗体亲和性高，用与免疫抗原不同的抗原筛选得到的抗体亲和性普遍较低。可用模拟天然体细胞突变的方法来提高亲和力。如混杂重组法，即将己获得的轻链或重链的V片段切下，再克隆至随机的文库中的V区构成二级文库，使H链和L链混杂，可以使抗体片段的亲和性提高。利用PCR错配将随机突变引人至抗体的抗原结合区，也能提高对抗原的亲和力。先用低亲和力的载体在噬菌体的PⅧ表达，筛选后、将抗体基因片段PCR扩增转至PⅢ上表达，可获得高亲和力的抗体片段。
抗体基因文库有两个优点，一是从不适合进行人工免疫的物种获得单克隆抗体，如人源单克隆抗体；二是可快速方便获得单克隆抗体。 将鼠源抗体的V区基因与人源抗体C区基因重组，获得的嵌合抗体（chimericalantibody），可保留鼠抗体对抗原的高亲和性，又减弱鼠源抗体对人的免疫原性，提高治疗性抗体的效果。
重组的嵌合抗体基因转化骨髓瘤细胞或中国地鼠卵细胞（CH0），可在其中表达。为了进一步地消除鼠抗体V区框架区（FW）的异源性，可实行CDR移植（CDR grafting），以获得与鼠FW类似的人FW结构的嵌合抗体。
噬菌体表达的抗体仅含V区（scFv）或Fab片段，缺乏Fc区，使抗体的稳定性下降，半衰期缩短，与Fc受体结合功能也消失。因此在抗体功能片段的末端连接A蛋白、酶、细胞因子、CD4和毒素等分子，既可增加抗体片段的稳定性，又可发挥某些生物学活性功能。
用抗体基因工程方法获得的抗体与效应分子交联物比用化学交联法具有优点：可以大量生产，不会因修饰作用影响抗体及效应分子的活性，效应分子还可根据需要进行改造。
此外在抗体片段的末端连接一段特异的双亲性螺旋（amphiphilic helixes）结构，如亮氨酸拉链结构（leucine zipper），可使单价的scFv或Fab片段在体内或体外形成稳定的双分子聚合体，从而提高抗体片段的亲和力。此法也可用于制备双特异性抗体。 噬菌体表达的抗体片段常常是在原核细胞（E.coli）中完成。原核系统表达抗体片段产量
高，成本低，快速易于操作。但抗体片段在原核表达系统中不能进行CH2糖基化，从而影响抗体的活性。因此重组抗体基因片段可转移至适合的骨髓瘤细胞系或哺乳动物细胞系（如CHO），甚至于植物细胞中表达，可以得到与淋巴细胞表达相同的抗体分子。免疫球蛋白IgA的重链和轻链及分泌片基因可以分别转化不同的植株，将表达这些蛋白的植株进行有性杂交，在杂交后代中可以装配成完整的IgA双分子。以植物作为生物反应器进行抗体的表达已有许多成功的研究报道，与动物细胞相比更为经济，具有广泛的应用前景。 抗体酶是抗原决定簇处于转换态结构的抗体。因为转换态分子极不稳定无法制备抗体，所以催化性抗体的获得主要是通过设计稳定的转换态的类似物作为半抗原，与载体蛋白交联后，免疫动物，获得针对半抗原的抗体，从中筛选具有催化活性的抗体。筛选催化性单克隆抗体所用的ELISA与筛选一般抗体的方法不完全一样，应根据催化反应的特点而进行适当的修改。经典的方法是先筛选出与底物或半抗原结合的抗体，然后从中再筛选出有催化活力的抗体，这种方法费时费力。利用催化性抗体对底物的催化活性，对底物进行适当修饰，使催化反应的产物可直接表现抗体的催化活性，这样可以简化检测步骤。
转换态类似物半抗原的设计，必须了解催化反应的转换态模型的结构特点。催化抗体的抗原结合位点上与转换态互补的某些催化基团的形成，能稳定转换态分子。此外有人把单克隆抗体分子用化学修饰方法引入一些活性基团，提高催化性抗体的催化与亲和效率。应用噬菌体抗体文库也可以筛选催化性抗体，可省去制备转换态类似物的复杂过程，直接用底物从文库中筛选有催化活性的抗体片段。如用半抗原免疫后制备的文库或文库经过多次混杂重组，则可以得到更高的亲和力的催化性抗体。抗独特型抗体也用于催化性抗体的制备，用酶作为抗原免疫小鼠获得能够封闭酶活性位点的单克隆抗体，将这个抗体用蛋白酶除去Fc片段，用Fab免疫其他品系的小鼠或家兔，得到的抗体具有相应的酶催化活性。
从理论上看，B细胞具有全套免疫球蛋白的多样性的胚系基因，当然也包括有催化作用的自身抗体在内。然而1989年Paul W.首次报道了人体的一种能催化蛋白质水解的免疫球蛋白。它是—种自身抗体，能水解血管活性肠肽（vasoactive intenstinal peptide，VIP）的Glnl6—Met17键。用VIP作为抗原能得到有催化作用的单克隆抗体，也能催化Glnl6—Met17键。大约有17%的人有这种自身抗体酶，但患有气喘的病人中该抗体与VIP的亲和力比健康人高50倍。由于VIP是一种气管松弛剂，因此有人认为这种VIP自身抗体的长期作用可能与气喘的过敏应答有一定关系。由此推测除了人工设计催化抗体以及发现的自身催化抗体外，用筛选单抗的方法，也有可能找到所需要的催化抗体。

『陆』 如何理解抗原的特异性和交叉反应性

如何理解抗原抗体结合的特异性和交叉反应性。
抗原与抗体结合的特异性，是指某一抗原表位与相应抗体结合的特异性。这种结合的分子机制是抗原表位的空间结构与抗体分子超变区互补的结果。而交叉反应是指两种抗原分子表面存在有相同或相似的抗原表位时，同一种抗体结合的现象。因此，交叉反应实质上也是抗原与抗体的特异性结合。

『柒』 抗体与不同抗原发生交叉反应的根本原因是

正确答案:B
解析：抗体对具有相同或相似抗原决定簇的不同抗原发生反应，称为交叉反应
。

『捌』 如何理解抗原抗体结合的特异性与交叉反应 如何理解抗原抗体结合的特异性与交叉反应

如抗原为A C物质，产生的抗体为抗-ac，
如抗原为B C物质，产生的抗体为抗-bc，

AC物质和抗-ac、BC物质和抗-bc产生的是特异性结合，
而AC物质和抗-bc、BC物质和抗-ac就会产生交叉反应.

『玖』 抗原交叉反应的概念

如抗原为A
C物质，产生的抗体为抗-ac，
如抗原为B
C物质，产生的抗体为抗-bc，
AC物质和抗-ac、BC物质和抗-bc产生的是特异性结合，
而AC物质和抗-bc、BC物质和抗-ac就会产生交叉反应.
抗原决定簇是抗原表面特征性的大分子,免疫系统识别不同的抗原,依靠的就是抗原决定簇的特异性。
高中教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇刺激淋巴细胞，使其分裂出效应细胞并具有对特定抗原的识别能力。
抗原是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。

『拾』 什么是共同抗原和交叉反应,其医学意义是什么

因为共同抗原的存在,由甲乙两种细胞刺激机体产生的抗体不仅可分别与其自身表面的相应抗原表位结合,而且由甲菌刺激机体产生的抗体还能与乙菌表面的相同表位结合;同样,乙菌刺激机体产生的抗体亦可与甲菌表面的相同表位结合,但反应程度较弱,这种抗原,抗体反应即称为交叉反应因为共同抗原的存在，由甲乙两种细胞刺激机体产生的抗体不仅可分别与其自身表面的相应抗原表位结合，而且由甲菌刺激机体产生的抗体还能与乙菌表面的相同表位结合；同样，乙菌刺激机体产生的抗体亦可与甲菌表面的相同表位结合，但反应程度较弱，这种抗原、抗体反应即称为交叉反应（cross reaction）。

交叉反应现象的形成可能与下列因素有关：

（1）共同抗原，不同生物体的某些生物大分子具有相同的抗原结构；

（2）共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位；

（3）相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空间构象十分类似，可以和同一种抗体的互补决定区相契合。

医学上的名词解释是：抗体或致敏淋巴细胞与具有相同或相似表位的不同抗原的反应，称为交叉反应