⑴ HIV的检测步骤有哪些
目前艾滋检测方法很多,步骤也不同。可以到医院或疾控免费检测,也可在家自测唾液收集器天猫检测项目的样品种类
1. HIV 抗体检测:全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。
2. HIV 抗原检测:全血、血清、血浆、病毒培养上清液。
3. T 淋巴细胞亚群测定:EDTA 或肝素抗凝全血。
4. HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测:血浆、滤纸干血斑(DBS)。
5. HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养:淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞(PBMC)及全血。
当然,实验室最常用的仍然是血液标本,其他只作为补充样本。
HIV 抗体检测
HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目,在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。
1. 初筛方法
(1)酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法,目前检测试剂已经发展到第四代,即同时检测血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗体,秉承「宁可错杀一千,不可漏网一个」的革命精神,其灵敏度远高于特异性,直叫 HIV 抗体无处遁形。
(2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)
这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法,其采用发光或荧光底物,既可检测抗体,也可联合检测抗原抗体,用发光或荧光仪测定结果,其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高,同时带来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。
(3)快速检测(RT)方法
此类方法操作简便快速,适用于应急检测、门诊急诊检测,但灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法,但是经济实惠,也有一定的市场影响力。主要包括以下几种方法:明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤试验、免疫层析试验。
2. 确认实验
(1)免疫印迹试验(WB)
WB 采用间接法检测样品中的抗 HIV-1/HIV-2 特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来,经过一系列处理后,硝酸纤维素膜显示与特异抗原的结合的抗体条带,从而确诊抗体的存在。
(2)条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)
实验原理基本同 WB 法,不再赘述。
HIV-1 抗原检测
1. 筛查实验
(1)酶联免疫吸附实验(ELISA 法):即第四代抗原抗体联合检测试剂盒。抗体包被固相反应孔(管)的底部,待测样本中 P24 抗原与包被抗体形成抗原抗体复合物,再加入酶(HRP)标记的 HIV-1 抗体与抗原结合,加底物显色,在酶标仪上读取结果。因同时检测抗原抗体,灵敏度大大提高,有效缩短了 HIV 感染的检测窗口期,但因试剂成本较高,在普通筛查实验室推广有一定难度。
(2)酶联荧光分析法(ELFA):待测样品的 p24 抗原与包被在固相孔(管)内的 p24 抗体结合,并被生物素标记的 p24 抗体识别。临床实验室应用前景不明朗,需要荧光检测设备,成本较高。
(3)电化学发光法(ECLIA):待测样品的 p24 抗原与包被抗体的磁性微粒和发光剂标记的抗体在反应管中温育,形成磁性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。
(4)抗原抗体快速检测法:同快速方法(RT)检测抗体,不同之处是用 HIV 抗体包被载体,检测灵敏度同样较差。
2. 中和试验
中和试验主要是 p24 抗原检测的补充试验,还可做 HIV-1RNA 的定性或定量检测,以排除筛查试验的假阳性。
(1)酶联免疫吸附实验(ELISA 法):待检样品先与中和剂(p24 抗原的抗体)共同孵育,如果样品中存在 p24 抗原,中和抗体将与之结合形成复合物,而不能与固相载体上的捕获抗体结合。
(2)酶联荧光分析法(ELFA):原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验(ELISA 法),中和率 ≥ 60 %,认为样品中的 p24 抗原是真阳性。
(3)电化学发光法 (ECLIA):原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验(ELISA 法),中和率大于 50%,认为样品中的 p24 抗原是真阳性。
HIV 核酸检测
目前国内 HIV 核酸检测试剂主要为 Taqman 实时荧光 PCR 检测试剂,可检测血浆、血清、组织器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA,DBS 可用于检测 RNA/DNA。全球目前正式用于临床诊断 HIV-1 急性期感染的核酸检测试剂比较少,主要是美国 FDA 批准的 Gen-Probe 公司生产的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性检测试剂和欧盟批准的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性检测试剂。
临床诊断相关的检测策略及结果报告
HIV 检测阳性结果的检测过程一般经历两个阶段,初筛和复检程序。以 HIV 抗体检测为例,具体流程如下:
试剂 1 进行初筛,结果无反应,报告「HIV 抗体阴性」;结果有反应,不能出具阳性报告,必须进入复检试验。对初筛有反应的样品,用原有试剂双份或双孔进行复检试验(或者两种试剂复检),如均无反应,报告「HIV 抗体阴性」;如均有反应或一个有反应一个无反应,进行补充试验(抗体确证试验和 HIV-1 核酸试验),报告 HIV 感染待确定。
⑵ 谁能告诉我中和抗体和抗体的区别
主要区别是,性质不同、性能不同、应用不同,具体如下:
一、性质不同
1、中和抗体
中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白。
2、抗体
抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。
二、性能不同
1、中和抗体
病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合,才能感染细胞,并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体,能够与病原微生物表面的抗原结合,从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体,防止侵入细胞。
2、抗体
是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。
三、应用不同
1、中和抗体
由于中和抗体是在病毒进入细胞之前破坏病毒的,所以,如果在接触HIV病毒之前体内就有抗体的话,就能够预防HIV感染。现有的疫苗如麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗、乙肝疫苗、甲肝疫苗,都是使接种者产生中和抗体以抵御病毒的。
2、抗体
抗体在医疗实践中应用甚为广泛。如用于疾病的预防、诊断和治疗方面都有一定的作用。临床上用丙种球蛋白预防病毒性肝炎、麻疹、风疹等,国际上用抗Rh免疫球蛋白预防因Rh血型不合引起的溶血症。诊断上如类风湿因子用于类风湿性关节炎,抗核抗体(ANA)、抗DNA抗体用于系统性红斑狼疮,抗精子抗体用于原发性不孕症的诊断等,治疗上如毒素中毒用抗毒治疗以及免疫缺陷性疾病的治疗等。
⑶ 中和抗体的介绍
中和抗体是当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合,才能感染细胞,并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体,能够与病原微生物表面的抗原结合,从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体,防止侵入细胞。
⑷ 大规模抗体检测有什么意义
3月25日,德国著名病毒学家德罗斯滕教授发表讲话称,感染新冠病毒后的病人会形成抗体,其中一部分无症状感染者可能在自己毫不察觉的情况下获得免疫,未来可以通过大规模抗体检测,核实这部分数据,这对整个疫情发展的建模和对未来的预测有非常重要的意义。
关于抗体,一个很重要的概念是滴定度,它反映的是抗体结合抗原特异性位点的最低浓度。我们不断稀释血清,直到最后抗体和血清样本不再呈现阳性,这个最低浓度即滴定度被用来表示抗体的数量。机体受到攻击时,可以产生很多抗体,对病毒起作用的抗体,我们称之为中和抗体。
通过中和实验检测,我们能知道中和抗体的滴定度。在一定数量抗体里,可能有很多的中和抗体,也可能只有很少的中和抗体。如果中和抗体多,当然对于抵御病毒非常有利。精确的了解免疫系统有多少中和抗体对于疫苗的开发以及检测非常重要。
(4)中和抗体检测与什么结合扩展阅读:
日本市民:希望自己的数据能对社会有帮助
东京都启动检测前,在板桥区内,受委托的结核预防会(位于东京)护士戴着防护面罩、口罩和手套介绍了采血的情景。流程与体检采血一样,1~2分钟内完成。协会负责人表示:“我认为通过了解感染的实际情况,将有助于今后的政策。”
在宫城县名取市的检测地点,县结核预防会的护士等人对随机抽选的居民实施采血。家住该市的打工男性(69岁)表示:“疫情扩大期完全没有出现身体不舒服的情况,但想进行查看。希望自己的数据能对社会有帮助。”
东京都福祉保健局体制支援担当部长田中爱子说:“抗体检测对制定今后的防疫对策也是十分重要的,请收到检测通知的人务必前来检测。”
⑸ 什么是抗原进化和中和抗体的关系
能够刺激机体产生免疫反应,并能受免疫反应排斥的物质叫抗原.机体受外来抗原物质刺激后,能产生一种与该抗原发生特异性结合的物质,称为抗体.
⑹ 什么样的抗体需要做中和活性分析
1、通过ELISA技术检测到叫total binding antibody,即结合抗体;
而中和抗体的检测一般都要用到细胞培养和对应的病毒或者细菌等病毒体,通过观察样品对该种病原体感染宿主细胞的抑制情况而测定出来的,即中和抗体效价。
中和抗体肯定具有结合抗体的性质,但结合抗体不一定具有中和活性。
2、对人体疾病而言,按照经典且目前行之有效的疫苗和免疫学角度看,中和抗体对预防这类疾病更有效。
但很多资料也表明,可能那些non-neutralizing但具有其他作用的功能性抗体在控制和预防感染性疾病中也发挥着十分重要的作用,例如补体作用,ADCC,ADCVI等等。
⑺ 病毒鉴定常用方法有哪些
寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应,目前主要采用病毒核酸检测。
开展蚊媒寨卡病毒检测时,对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
开展寨卡病毒实验室检测时,应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
(一)临床标本检测。
1.病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本,一般认为发病7天内检测阳性率高。
(1)核酸检测:采用荧光定量RT-PCR方法,是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。
(2)病毒分离:将标本接种于蚊源细胞(C6/36)或哺乳动物细胞(BHK21、Vero)进行分离培养,出现病变以后,用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
2.血清学检测
(1)血清特异性IgM抗体:发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体,但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性,提示患者可能新近感染寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应,易于产生假阳性。
(2)中和抗体:采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染,可以确诊。
(二)媒介标本检测。
1.标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫,按照采集地点,每10~20只为一份进行研磨处理。
2.病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测
3.病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。
⑻ 中和抗体水平与ELISA抗体水平的区别
1、通过ELISA技术检测到叫total binding antibody,即结合抗体;而中和抗体的检测一般都要用到细胞培养和对应的病毒或者细菌等病毒体,通过观察样品对该种病原体感染宿主细胞的抑制情况而测定出来的,即中和抗体效价。中和抗体肯定具有结合抗体的性质,但结合抗体不一定具有中和活性。
2、对人体疾病而言,按照经典且目前行之有效的疫苗和免疫学角度看,中和抗体对预防这类疾病更有效。但很多资料也表明,可能那些non-neutralizing但具有其他作用的功能性抗体在控制和预防感染性疾病中也发挥着十分重要的作用,例如补体作用,ADCC,ADCVI等等。