㈠ 求教DMSO殘留量檢測方法
色譜條件1) 色譜柱：DB 624, 0.53 mm×30 m，膜厚3 µm；2) 柱溫：初始溫度40 ℃，保溫10min；以60 ℃/min升至200℃保持3分鍾；3) 進樣口溫度：140 ℃4) 檢測器溫度：250 ℃5) 載氣：N2；6) 載氣流速：5 ml/min；7) 分流比：1:1頂空進樣器條件1) 平衡溫度：120℃2) 平衡時間：30 min3) 針溫： 130 ℃4) Transfer line 溫度：140 ℃5) 加壓時間：0.5min6) 進樣體積：1.0ml精稱樣品約0.1 g於20 ml 頂空瓶中，加入1.0 ml 純化水/DMF/DMSO溶解，密封。
如果需要檢測專業得第三方檢測機構，科標可以檢測
㈡ 二甲基亞碸的性質
二甲亞碸 葯物名稱： 二甲亞碸
葯物別名： DMSO；萬能溶媒
英文名稱： Dimethyl Sulfoxide
葯物說明： 暫無
主要成分： C2H6SO
性狀特徵：分子量：78.14切忌：本品不能和酸共混，遇酸發生歧化反應，可能爆炸。
無色粘稠液體。有吸濕性。能與水、乙醇、乙醚、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二惡烷和芳 烴 化合物等任意互溶，不溶於乙炔以外的脂肪烴類化合物。mp：18-20℃，bp:189℃， 密度：1.100
功能主治： 作透皮促進劑、溶劑和防凍劑。
用法用量： （1）作透皮促進劑，常用於氫化可的松、氟美松、膚輕松、睾酮、胰島素、肝素、維生素類、水楊酸類等的制劑。5％以下無透皮作用，5％以上隨濃度增加而作用增強，常用其30％～50％水溶液。目前僅供外用。 （2）作溶劑和防凍劑，60％水溶液能降低冰點至-80℃。
不良反應： 暫無
注意事項： 高濃度可使皮膚有燒灼不適感，或瘙癢或出現紅斑，偶可發生疤和皮炎。有時可致惡心、嘔吐，高濃度大面積使用可引起溶血。
【鑒別】取本品1.5ml,緩緩滴入冷卻的氫碘酸2.5ml中,迅速濾過,在減壓下乾燥,所得殘渣為不穩定的深紫色晶形固體，具有難聞的氣昧，溶於氯仿並生成紅色溶液。
【檢查】光吸收取本品適量，通入乾燥氮氣流15分鍾，立即置於1cm吸收池中,用水為空白，照分光光度法（中國葯典1990年版二部附錄24頁）,在275nm波長處測定吸收度，不得大於0.30；再分別在285nm及295nm的波長處測定吸收度,其與275nm處吸收度的比值，分別不得大於0.65及0.45，並在270～350nm范圍內，不得有最大吸收峰。 水分 不得過0.2％（中國葯典1990年版二部附錄55頁）。 二甲基碸 取二苯甲烷,製成0.025％的丙酮溶液，作為內標溶液；精密稱取二甲基碸適量,用內標溶液稀釋成0.050％的溶液，作為對照溶液；另取本品適量，精密稱定，用內標溶液稀釋成50％的溶液，作為供試品溶液。照氣相色譜法（中國葯典1990年版二部附錄31頁(3)法），用塗布濃度為10％聚乙二醇20M為固定液，（按二甲基碸計算的理論板數應大於1500，二甲基碸峰與內標峰的分離度應大於2），在柱溫150℃測定供試品溶液中二甲基碸與二苯甲烷峰面積的比值，不得大於對照溶液中二甲基碸與二苯甲烷峰面積的比值。
【注意】本品易吸濕，避免與塑料接觸。
【貯藏】遮光，密封保存。
㈢ 細胞功能檢測
MTT、CCK8法
技術原理： MTT是3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide的簡稱，商品名為噻唑藍。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。然後採用二甲基亞碸（DMSO）溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在570 nm波長處測定其光吸收值，反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
CCK8法原理是WST-8四唑鹽（2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium）能被活細胞內的脫氫酶還原成橙色甲臢染料，然後測定450 nm下的吸光值，生成的甲臢的量與活細胞數量成正比。CCK8法可以做6天左右的生長曲線，1-6天每天收取細胞樣本檢測。也可以類似MTT法，在相同時間比較不同處理組。
BrdU、EdU法
技術原理： BrdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，可以代替胸腺嘧啶核苷插入復制的DNA雙鏈中，這種置換可以穩定存在，並傳遞到子細胞中。細胞經固定和變性處理後，可以用免疫學方法檢測DNA中的BrdU的含量，從而判斷細胞的增殖能力。
EdU也是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖過程中代替胸腺嘧啶插入正在復制的DNA中。EdU與熒光染料可以特異性地反應檢測DNA的復制。
CFSE檢測
技術原理： 羥基熒光素二醋酸鹽琥珀醯亞胺酯（CFSE）是一種可以穿透細胞膜的熒光染料，具有與細胞特異性結合的琥珀醯亞胺酯基團和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團。CFSE被細胞吸收後，不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到蛋白質上。隨著細胞增殖分裂，細胞內CFSE的含量被平均分配到兩個子細胞中，子細胞熒光強度減半。隨著細胞的增殖，CFSE不斷被稀釋，使用流式細胞儀對CFSE進行檢測，可以對細胞的增殖進行分析。
免疫組化檢測
技術原理： 使用免疫組化的方法對細胞增殖相關抗原-Ki-67、PCNA進行檢測。這類標志物只表達在增殖細胞中，常用於反映體內腫瘤細胞的增殖能力。
細胞克隆形成
技術原理： 細胞克隆形成實驗是用來檢測細胞增殖能力、侵襲性、對殺傷因素敏感性等的重要技術方法。當單個細胞在體外增殖6代以上，其後代所組成的細胞群體，成為集落或克隆。每個克隆含有50以上的細胞，大小在0.3-1.0 mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。各種理化因素可能導致細胞的克隆形成能力發生改變。通過一定的實驗方法可以對細胞的克隆形成能力進行檢測，細胞克隆形成率即細胞接種存活率，表示接種細胞後貼壁的細胞成活並形成克隆的數量。貼壁後的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。
細胞遷移
Transwell檢測
技術原理： 細胞遷移是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度後而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。
Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔，上室內添加上層培養液，下室內添加下層培養液。將細胞種在上室內，由於膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
細胞侵襲
Transwell檢測
技術原理： 細胞侵襲是指細胞向局部侵犯，細胞侵襲實驗可用來研究細胞和胞外基質之間的相互作用。胞外基質不僅為細胞提供了結構支架，同時也包含了許多細胞生存及生長過程中生物功能因子。細胞可以分泌酶，用於降解胞外基質中特定的組分，從而使細胞可以在細胞間質中移動。胞外基質膠模仿體內細胞外基質胞外基質環境，包含了支撐細胞結構的最基本的組分。轉移性腫瘤細胞由於其高遷移和/或降解胞外基質的酶活從而表現出較強的侵襲性。
鋪有 Matrigel 膠的 Transwell 小室可用於檢測細胞侵襲能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上下層培養液以鋪有 Matrigel 膠聚碳酸酯膜相隔，Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8 μm，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，並通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以細胞小室上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，上室加入重懸的瘤細胞，具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。腫瘤細胞穿過重建基質膜的能力與它的體內侵襲轉移能力表現出較好的相關性，可以用重建基質膜模型初篩抗侵襲葯物。
細胞凋亡
Annexin V-PI雙染色流式檢測
技術原理： 在正常細胞中，磷脂醯絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂醯絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。AnnexinV是一種Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂醯絲氨酸（PS）有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的PS與凋亡早期細胞的胞膜結合。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，通過流式細胞儀檢測可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來。
Caspase3活性檢測
技術原理： Caspase3是細胞凋亡最重要的執行蛋白之一，對其功能/活性的檢測可以反映細胞的凋亡情況。可以使用Western Blot檢測細胞中Caspase3蛋白的表達水平或者使用流式細胞儀檢測細胞群體中Caspase3陽性細胞的比例。
細胞周期
PI（碘化丙啶）染色
技術原理： 細胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期：即 DNA 合成前期 ( G1 期 )、DNA 合成期 ( S 期 ) 與 DNA 合成後期 ( G2 期 )。某些細胞在分裂結束後暫時離開細胞周期，停止細胞分裂，執行一定生物學功能 ( G0 期 )。由於細胞周期各時相的 DNA 含量不同，通常正常細胞的 G1 / G0 期具有二倍體細胞的 DNA 含量 ( 2N )，而 G2 / M 期具有四倍體細胞的 DNA 含量 (4N)，而 S 期的 DNA 含量介於二倍體和四倍體之間。PI可以與 DNA 結合，其熒光強度直接反映了細胞內 DNA含量。因此，通過流式細胞儀 PI 染色法對細胞內 DNA 含量進行檢測時，可以將細胞周期各時相區分為 G1 / G0 期，S 期和 G2 / M期，獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟體計算各時相的細胞百分率。