國家血清抗體檢測的方法有哪些

Ⅰ HIV有幾種檢測方法

一、 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。

二、 顆粒凝集法（PA）

PA為快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性，應經WB證實。PA不需任何特殊儀器，其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鍾。缺點有假陽性，且價格昂貴。

三、快速試劑

(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)

雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外，肉眼觀察，定性的免疫分析，檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體，用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用，本品檢測陽性者，需進行進一步篩查確認。

(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑

InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法， 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測，凡由該試劑測定為陽性者，需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。

四、HIV-抗體確認實驗

免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。

(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。

確認試驗流程:

有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，

WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。

(二)免疫熒光實驗(IFA)

IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。

Ⅱ 血站是用什麼方法檢測HIV抗體的

HIV-抗體檢測方法
常見檢測方法
目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法，這不但是由於這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染後除早期短暫的」窗口期」外的整個生命期間長期穩定地存在並可被檢測到。在一些特殊情況下，當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。 一、 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。
二、 顆粒凝集法（PA）
PA為快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性，應經WB證實。PA不需任何特殊儀器，其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鍾。缺點有假陽性，且價格昂貴。
三、快速試劑
(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外，肉眼觀察，定性的免疫分析，檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體，用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用，本品檢測陽性者，需進行進一步篩查確認。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法， 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測，凡由該試劑測定為陽性者，需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。
四、HIV-抗體確認實驗
免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。

Ⅲ 艾滋病抗體的檢查方法

艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測：檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法，一般要經過兩個步驟：首先做初篩試驗，如果為陽性，再做確認試驗，確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大，且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄－PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由於該法相對窗口期較長，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對簡單，整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果，而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准，但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查，因此要求操作簡便，成本低廉，而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡單，僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用，特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便，成本低廉的檢測方法，該方法結果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用，缺點是必須使用新鮮樣品，特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡便，過程短暫，整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物，以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定，分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析，且大多數為間接法及雙抗原夾心法，兩種方法各有優缺點，但都簡單而快速，數分鍾即可得出結論，不需儀器設備，操作人員不需特殊訓練，試劑穩定，適用於單份測定等。

Ⅳ 血清中禽流感抗體含量的檢測方法

禽流感是由A型流感病毒引起的一種高度接觸性傳染性疾病。給世界養禽業造成了巨大的經濟損失。禽流感病毒可分為不同的亞型，世界各地的禽流感主要由高致病性的H5和H7兩種亞型引起，而人對其中的H1和H3亞型易感。快速診斷禽流感病毒具有重大意義。目前禽流感的實驗室檢測是比較快速、准確的方法。隨著血清學實驗技術和生物工程技術的飛速發展，禽流感診斷技術的研究也不斷取得新進展。瓊脂擴散試驗、血凝和血凝抑制試驗等常規方法的使用雖有一定的優勢，但免疫熒光法和ELASA也日益顯示出其快捷准確的特點：分子生物學的發展為核酸序列分析法的建立創造了條件,也使PCR，RT－PCR及核酸探針等檢測技術成為可能。這篇文章就是對有關該病的診斷方法加以總結，並提出了認為比較可行的改進方法，旨在方便對禽流感做出及時而有效的診斷並採取相應措施。

1. 病毒的分離鑒定

無菌採集病料經處理後接種9－11日齡雞胚，收取尿囊液測定血凝活性。若為陰性則應繼續盲傳2－3代。對具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HI)試驗!以排除ND感染。然後用免疫擴散等方法來檢測特異核心抗原，核糖蛋白(NP)或基質蛋白(MP)，再用血凝抑制試驗和神經氨酸酶抑制試驗鑒定A型流感病毒亞型。分離鑒定的同時進行致病力試驗，確定毒力強弱。但是流感病毒「O」相毒株不凝集雞紅細胞，故近來在流感病毒鑒定中常用豚鼠或人紅細胞來代替。然而，該兩種細胞無細胞核，沉積慢，一般在紅細胞凝集及凝集抑制測定中需60分鍾才能觀察結果，同時在「U」型孔板中，很難沉積成像眼淚樣的點即當中常有小空[1]。

病毒的分離鑒定對禽流感的診斷比較確實,但操作程序繁瑣、費用多、耗時費力。

2. 血清學診斷技術

2.1 瓊脂擴散(AGP)試驗

進行病毒抗原型特異性鑒定即用已知陽性血清和末知抗原進行AGP試驗。

受檢樣品是具有血凝素活性的雞胚尿囊液。AGP是用來檢測A型流感病毒群特異性血清抗體，即抗核糖蛋白(RNP)和基質蛋白(MP)抗體，因而適用於鑒定流感病毒 。1979年Beard首次將AGP用於禽流感抗體檢測[2]。

此法雖簡單易行，但是敏感性較差，易出現假陽性。AGP最常用的是免疫雙擴散，趙增連、陳海燕等分別開展了禽流感病毒快速定型雙擴散法的研究，不僅提高了其敏感度，且快速省時，在此方法基礎上建立的AGP診斷技術及其診斷試劑盒，在全國范圍內得到推廣應用，並取得良好的效果。

2.2 血凝(HA)和血凝抑制試驗(HI)

一般情況下，新分離毒株要先鑒定出特異性NP或.MP抗原型(用AGP)確定禽流感病毒，再做HA亞型的鑒定[3]。

現已有人採用改進HA試驗方法，稱為HA加敏法。該法測抗體效價比常規性高2－4倍，若抗原用乙醚裂解其敏感性比常規法高4－6倍，但觀察時以30min內為好，否則易出現假陽性。另外，還應注意在HI試驗時，應先除去特異性凝集反應。許多禽類血清都含有非特異性因子，能和紅細胞表面受體競爭性地作用於病毒表面的血凝素而發生非特異性凝集反應。通常用受體破壞酶(RED)即霍亂菌培養液處理法或高碘酸鈉法制備血清[4]。

HA、HI 特異性好，是亞型鑒定的常用方法，但其操作過程繁瑣費時，並且由於用已知HA亞型的抗血清不能檢出新的HA亞型的禽流感病毒，所以用該方法鑒定不如瓊脂擴散實驗簡便和快捷。

2.3 神經氨酸酶抑制試驗(NIT)

根據A 型流感病毒的表面抗原特性,特別是血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)特性，不僅可通過HI試驗對病毒進行堅定，而且可通過NI試驗進行鑒定。1983 R.A.Van.Densen介紹了NI試驗的一種改進法－平板微量NI試驗，此法雖不能提供常量法的定量，但卻是A型流感病毒的病毒分類和抗體檢測的快捷方法， 試驗證明微量NI試驗能對分離物做出准確鑒定而常量NI試驗檢測亞型混合物似更敏感[5]。

目前國家獸醫實驗所已將微量NI試驗列為流感病毒分離物定型及篩選畜禽血清9型NA抗體的常規方法，診斷中也已廣泛採用此法特別是美國在80年代火雞發生流感病毒期間，每次流行所得的血清樣本用微量NI試驗所作出的A型流感病毒亞型鑒定結果已為病毒分離、疫苗接種和流行病學資料所證實。這種方法已被證明是快速的且成本較低和有可重復性。這種技術的可靠性將導致NI試驗的廣泛應用。

2.4 中和試驗(NT)

病毒中和實驗技術是反映機體抵抗特定病毒感染能力的最可靠方法。流感病毒中和實驗技術有以下優點：（1）由於中和抗體作用於流感病毒表面血凝素蛋白（HA），使流感病毒失去感染能力，因此，流感病毒中和實驗主要用於檢測血清中的特異性抗血凝素蛋白抗體。（2）流感病毒中和實驗既能檢測病毒株的功能性變化，又能反映機體的抗病毒水平。（3）該方法主要使用感染性病毒，不需要進行病毒或病毒蛋白的純化，因此，可以被迅速用於檢測新病毒或人群免疫狀態[6]。

以中和試驗(NT)來鑒定或滴定流感病毒時常用雞胚或組織培養細胞，操作方法與其他病毒(如NDV)的中和試驗相同。病毒中和實驗技術是一個相當復雜的過程，參與中和反應的因素有病毒、抗血清和宿主細胞。這些因素的變化都會影響中和實驗的結果。因此，對中和實驗的整個過程進行嚴格的質量控制。每次測定必須設立陽性和陰性血清對照，陽性和陰性細胞對照，以及對病毒使用劑量進行滴定。

NT試驗是最敏感而特異的血清學方法，只有抗體與病毒顆粒上的表面抗原相對應，特別是與吸咐到宿主細胞上的病毒表面抗原相對應，才能在實驗中取得滿意的顯示效果。 因此，某一個血清型的中和試驗抗體只與同組內地其他病原表現出有限的交叉反應。病毒中和試驗操作繁瑣耗時費料，臨床上幾乎不用。但作為經典方法在病毒鑒定中起著重要作用，許多新的檢測方都要與之為標准進行比較[7]。

2.5免疫熒光技術(IFT)

免疫熒光技術就是熒光抗體技術(FAT)。 IFT早在1961年就開始用於人類流感的快速診斷。1984年濱西法尼亞州爆發禽流感時，Skeeles將IFT首次用於AIV的檢測。IFT最早用於病毒的鑒定和定位病毒感染細胞中特異性抗原。主要是核內熒光:用MP抗原的熒光抗體主要出現胞質熒光，核內也有部分熒光[8]。

用於禽流感病毒的診斷常用直接熒光抗體法即在組織觸片上直接染色，以熒光顯微鏡檢查熒光 。一種AIV的熒光抗體可用來檢測不同亞型的其他病毒。

IFT用於診斷具有快速、簡便、敏感性好的特點，而且費用較低，其敏感度同病毒的分離鑒定相當，有時高於用雞胚進行的病毒分離。但是需要注意的是如何避免和降低標本中出現的假陽性(非特異性熒光)問題。

對一株雜交瘤細胞分泌的流感病毒的單克隆抗體進行檢測時，發現間接固相免疫熒光技術的敏感性比HI 高40－150倍。間接免疫熒光技術也可以用來檢測核蛋白(NP)基質蛋的(MP)抗原與抗體的反應，其敏感性很高。但對抗原制備要求較高，需用非離子型去污劑對純化的病毒粒子進行裂解[9]。

2.6 酶聯免疫吸附法(ELISA)

ELISA的基本原理是：酶結合物與相應抗體或抗原特異性結合，再遇酶底物時，在酶的強烈催化下使原來無色的底物產生化學反應，即形成有色的產物，便可用肉眼或分光光度計定量檢測其含量。該方法具有特異性、敏感性、快速性和簡易性等優點。在流感病毒微量中和實驗中，酶結合物（HRP標記的羊抗鼠IgG抗體）與存在於MDCK細胞膜上的病毒核蛋白抗原-核蛋白單克隆抗體復合物結合，HRP酶催化OPD，使無色底物形成橙黃色化合物，再由ELISA檢測儀測定吸光度值，從而獲得中和抗體滴度[11]。

1974年Jenning等首先用ELISA對注射流感病毒所產生的抗體消長規律進行了檢測。Lanbre認為ELISA的敏感性遠高於HI補給結合反應 。Meulemans(1987)對ELISA、AGP、HI檢測AIV抗體進行了比較研究。發現AGP和ELISA一樣均能檢測型特異性抗原(抗體)，但敏感性遠低於ELISA，HI適用於亞型的檢測，其敏感性不如ELISA。1993 年Shodihall用混合纖維素脂膜或硝酸纖維素膜代替微量反應板，建立了快速診斷的DAS－ELISA大大縮短了診斷時間，並可保留ELISA的特異性、敏感性，其結果又不需要特殊儀器分析、可用肉眼判定。

隨著分子生物技術的發展，中國農業科學院哈爾濱獸研所的李海燕等用表達禽流感病毒核蛋白的桿狀病毒感染S9昆蟲細胞，以其表達產物制備抗原，建立了以桿狀病毒系統表達的AIV核蛋白為抗原的禽流感間接(重組核蛋白)ELISA診斷技術(rNP－ELISA)確定了其最適工作條件，並對3138份雞血清進行了檢測。實驗證明rNP－ELISA與全病毒間接ELISA(AIV－ELISA)，AGP及HI的符合率分別為99.9%、97.8%、98.8%，並能100%檢出AGP陽性及疑似HI陽性的血清樣品。 這證明了rNP－ELISA是檢測A型禽流感病毒血清特異性抗體的一種特異、敏感、微量、快捷、經濟的血清學診斷技術[11]。

ELISA方法的敏感性和特異性與抗原的純度直接相關 。1984年Abraham等報道了抗原快速提純法，所需時間比常規法縮短10倍，並且研究結果表明應用提純抗原幾乎全部排除了假陽性反應。

目前美國Kiregard Reery和Labortories有試劑盒出售。ELISA成為AI流行病學普查及早期快速診的最有效和最實用的方法。

3 分子生物學技術

近年來，隨著現代生物技術的發展，分子生物技術已被大量應用於禽流感的快速診斷。

3.1聚合酶鏈反應(PCR)及反轉錄---聚合酶鏈反應(RT—PCR)

PCR是近來發展成熟起來的一種體外基因擴增技術，能在數小時內使DNA呈指數增加。已成功地用於多種病毒的基因檢測和分子流行病學調查等其檢測原理為：尋找傳染性因子的特異DNA序列。對待測樣品進行PCR擴增， 如果檢測出了相應的擴增帶，則判為陽性反應；反之，無擴增帶則為陰性反應。

鑒於引起致病的禽流感病毒多是H5和H9血清亞型，在PCR技術的基礎上，崔尚金等(1998)建立了一種直接檢測禽糞樣和雞胚尿囊液中AIV—H9亞型RNA的RT－PCR反應，並將此法與AGP和電鏡技術作了比較，結果表明引物的特異性決定了產物的特異性，並且該方法靈敏度高，檢測過程僅需8h左右，並且大大縮短了感染後的檢出時間。

應用毛細管PCR(15min30個循環)代替常規PCR(2.5個小時30個循環)以進一步縮短檢測時間的研究也已展開並進入更深入的領域，以期用於不同樣品(組織、組織液、分泌液、糞便等)的檢測，區分高致病力毒株和低致病力毒株與非致病力毒株，從而深入探討該方法在AIV的臨床早期診斷，流行病學調查及發病機制中的應用價值，為我國制定AIV的綜合防制措施做出貢獻[12]。

3.2 核酸探針技術/核酸分子雜交技術

這項技術是目前生物化學和分子生物學研究應用最廣泛的技術之一，是定性和定量檢測特異DNA或RNA的有力工具。

核酸探針技術的原理，在進行雜交時，用一種預先分離純化的已知DNA或RNA序列片段去檢測末知的核酸樣品，對作檢測用的已知DNA或RNA序列片段加以標記的片段就稱為核酸探針。作為核酸探針的DNA或RNA是各種病原微生物基因的一部分。 在變性分開的待檢DNA或RNA單鏈中加入與其有互補作用的核酸探針。探針在一定條件下就能與原來變性分開的DNA或RNA單鏈上的互補區段形成氫鍵，從而結合成雜交雙鏈，通過洗滌，除去未雜交上的標記物，然後進行放射自顯影，即可確定原待檢樣品有無與探針互補的DNA或RNA序列。

Bashiruddin等(1991)報道了擴增HA基因來分析致病毒株與非致病毒株的差異，證實了致病毒株與非致病毒株氨基酸的差異，顯示了本方法的應用前景[13]。

3.3熒光PCR法

利用生物學手段，用熒光PCR方法快速檢測禽流感病毒的方法已在北京通過專家鑒定，這一研究成果不僅在國內屬於首次，而且在國際上也屬於先進水平。它與國際標准方法雞胚病毒分離相比，不僅無需做雞胚病毒分離培養，而且時間也由原來最短的21d縮短為4h。

4 電鏡技術

由於流感病毒為正粘病毒，屬於形態特徵性強的病毒,因而可用電鏡技術來診斷。為提高禽流感的檢出率，除樣品制備技術外，取病料的部位和時間也是獲得准確檢驗結果的關鍵。病料的採集部位及取材時間應根據禽流感病毒在動物體內分布特徵及其感染特性而定[15]。

5 流感實驗室檢測中應注意的若干問題（高致病性流感病毒）

（1）禁止在同一實驗室，更不應在同一接種櫃中，同時處理接種未知臨床標本、已知陽性標本

（2）禁止在同一實驗室，同一時間處理，接種采自不同動物的標本；動物標本（如禽、豬等）必須與人的標本分別保存。

（3）接種後剩餘原始標本，尤其分離出病毒的標本需暫時凍存，有條件的應置-70℃或以下保存，以便需要時可進行復查，待分離物經國家流感中心鑒定完後方可處理掉。分離陰性的標本應隨時棄之。

（4）嚴禁實驗室交叉污染：在病毒分離時嚴禁設陽性對照及操作在人群中已消失的流感病毒。

（5）向國家流感中心送毒株時，量至少需5 ml，同時需自己保存一些，以便寄送過程發生意外時可繼續補送。

（6）流感病毒在-20℃～-40℃ 時不穩定，故不宜在此溫度下長期保存。

（7）雞胚中分離出的流感病毒，應盡量別在MDCK細胞上傳代。因當今國內所用的MDCK細胞屬腫瘤細胞系，一旦病毒通過它傳代就無法用於疫苗制備。

（8）寄送毒株時一定需附上送檢表。寄送毒株需及時，尤其鑒定不出的，異常的毒株應盡快向國家流感中心寄送。寄送時用快速直送國家流感中心[16]。

總結

使用常規方法檢測禽流感及其抗體仍是目前世界上普遍接受的方法。這些方法包括病毒的分離、瓊脂擴散實驗鑒定病毒和測定特異性的血清抗體，血細胞凝集及其抑制試驗鑒定病毒或血清抗體亞型。 採用雞胚中和試驗來鑒定病毒或血清抗體亞型也是一種可以接受的方法，但相對血凝抑制試驗較為麻煩。隨著科學技術的發展，檢測該病毒和血清的方法出現了免疫光法和ELISA法，這些方都有快捷的特點，特別是日益完善並趨向成熟的ELISA檢測方法,因其簡捷、敏感、特異性強等優點而越來越得到廣泛的重視和應用。隨著分子生物學的發展，核酸序列分析法越來越可能成為一種更准確可行的方法,特別是它能從分子生物學的發展，核酸序列分析法越來越可能成為一種更准確可行的方法，特別是它能從分子水平揭示HPAIV甚至潛在HPAIV毒株。這種方法雖然在一般實驗室還不能應用,但RT－PCR技術為從基因水平檢測禽流感病毒RNA提供了靈敏、特異和快捷准確的方法。正在進行的應用毛細管PCR代替常規PCR，以進一步縮短檢測時間的研究和根據禽流感NP的高度保守性而建立的rNP－ELISA檢測法，不僅具有與AGP、HI同樣的特異性，而且具有更高的靈敏性，可在微克水平上進行檢測!都是很有前途的方法。將rNP－ELISA檢測技術及其成套的成品試劑組裝成診斷試劑盒，也取得了很好的實驗效果。

在以上各種檢測方法及科學技術發展的基礎上，將PCR技術與ELISA技術結合起來，建立一種新的實驗室檢測AIV的方法，將有較大的研究價值其實。其實驗原理（以此類方法中最簡單的雙引物雙標記法為例）如下：

PCR的一對引物中!其中一種引物用生物素標記，另一種引物用地高辛標記，酶標微孔板上用生物素的親和素包被(生物素的親和素與生物素特異的結合)。PCR擴增後純化片段加入微孔板中。此時，微孔板上包被的生物素親和素將與引物上的生物素結合而捕捉了PCR片段，再在微孔板中加入辣根過氧化物酶標記的抗地高辛抗體，該抗體將與另一引物上的地高辛結合，從而形成生物素親和素－生物素－PCR片段地－高辛－抗地高辛－酶的復合物。加入酶的相應底物進行顯色，便可判斷PCR擴增的有無。由於該方法是PCR技術和ELISA技術的結合，所以它是一種兩級放大系統,即PCR放大和ELISA放大。故而它的靈敏度更高，同時這種方法避免了PCR產物分析時的電極及染色過程，所以更為快捷、簡便、靈敏。

Ⅳ 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

(5)國家血清抗體檢測的方法有哪些擴展閱讀

自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

Ⅵ 臨床上常用的血清學檢查方法有哪幾種

主要有沉澱試驗、凝集試驗、補體結合試驗、中和試驗及與標記抗體有關的試驗。

（1）凝集試驗

包括玻板凝集法、全血平板凝集法、試管凝集法和瓊脂擴散法。

①全血平板凝集反應

此法常用於傳染性鼻炎、雞白痢、雞傷寒、雞慢性呼吸道病等禽病的檢疫和監測。

②瓊脂擴散反應

當適當比例的抗原抗體在含有電解質的瓊脂網狀基質中自由擴散相遇時，形成肉眼可見的白色沉澱線。此法常用於雞傳染性法氏囊病、雞馬立克氏病、禽流感、禽腦脊髓炎、禽腺病毒感染等病的診斷，還常用於抗體監測和血清學流行病學調查。

（2）血凝與血凝抑制試驗

試驗原理：某些病毒能夠與人或動物的紅細胞發生凝集，稱為血凝反應（HA）。這種凝集反應可被加入的特異性血清所抑制，稱為紅細胞凝集抑制試驗，即血凝抑制反應（HI）。

此方法常用於雞新城疫、禽流感、雞產蛋下降綜合征等病毒的診斷和血清學監測。

Ⅶ 傳染病監測的技術方法都有哪些

一、病原學檢查
1、病原體的直接檢出：許多傳染病可通過顯微鏡或肉眼檢出病原體而明確診斷，如從血液或骨髓塗片中檢出瘧原蟲、利什曼原蟲、微絲蚴、回歸熱螺旋體等；從大便塗片中檢出各種寄生蟲卵及阿米巴原蟲等；從腦脊液離心沉澱的墨汁塗片中檢出新型隱球菌等；肉眼觀察糞便中的絛蟲節片和從糞便孵出的血吸蟲毛蚴等。
2、病原體分離：細菌、螺旋體和真菌可用人工培養基分離培養，如傷寒桿菌、志賀桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體和新型隱球菌等。立克次體需經動物接種或細胞培養才能分離出來，如斑疹傷寒、恙蟲病等。病毒分離一般需細胞培養，如登革熱、脊髓灰質炎等。用以分離病原體的檢材可採用血液、尿、便、腦脊液、痰、脊髓和皮疹吸出液。
3、特異性抗原檢測：可較快地提供病原體存在的證據，其診斷意義較抗體檢測更為可靠。常用方法有凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、酶免疫測定（EIA）、熒光抗體技術（FAT）、放射免疫測定（RIA ）、流式細胞檢測（FCM）等，必要時可作核酸定量檢測、基因晶元技術檢查。
4、特異性核酸檢測：可用分子生物學檢測方法，如放射性核素或生物素標記的探針作DNA印跡法或RNA印跡法，或用聚合酶鏈反應（PCR）或反轉錄PCR（RT-PCR）檢測病原體的核酸。必要時還可作原位聚合酶鏈反應（PCR）。
二、特異性抗體檢測
在傳染病的早期，特異性抗體在血清中往往尚未出現或滴度很低，而在恢復期或後期抗體滴度有顯著升高，故在急性期及恢復期雙份血清檢測其抗體由陰性轉為陽性或滴度升高4倍以上有重要診斷意義。特異性IGM抗體的檢出有助於現存或近期感染的診斷。蛋白印跡法（WB）（又稱免疫印跡法）的特異性和靈敏度都很高。常用於艾滋病的確定性診斷。

Ⅷ 迄今為止，我國檢測新冠病毒有哪些方法

1、熒光PCR法。PCR法指的是聚合酶鏈式反應，能將微量的DNA大幅增加。熒光PCR檢測的原理為——隨著PCR的進行，反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。最後通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
2、聯合探針錨定聚合測序法。這種檢測主要是用專門的儀器檢測測序載片上DNA納米球攜帶的基因序列。這種檢測的靈敏度高，不容易漏診，但結果也容易受多種因素的影響而不準。
3、恆溫擴增晶元法。檢測原理是基於核酸之間的互補結合特性開發的一種檢測方式，能夠用於定性或定量測量存在於生物體內的核酸。
4、病毒抗體檢測。抗體檢測試劑是檢測血清中由病毒進入人體後刺激人體產生的IgM或IgG抗體，IgM抗體出現較早，IgG抗體出現較晚。
5、膠體金法。膠體金法是用膠體金試紙進行檢測，也就是常說的快速檢測試紙。這種試紙經過特殊標記，上面有孔，用於滴入受檢者的血清樣本。
6、磁微粒化學發光法。化學發光法是一種高度敏感的免疫檢測，凡具有抗原性的物質都可以用這種方法測定。

Ⅸ 核酸檢測的方式都有什麼

核酸檢測主要有酸檢測試劑、抗體檢測兩種方法，第一種方法通常是通過咽拭子進行PCR檢測，基因擴增，然後再進行核酸檢測。 而抗體檢測是選擇抽血，抽血的方法得出結果看，觀察其抗體滴度是否升高，這種情況常常是指在抽血前常出現不能產生抗體的情況。

核酸檢測是一種「進行時」檢測，通過聚合酶鏈反應等方法檢測病毒基因組中特定的核酸序列，從而判斷被檢測者此刻是否感染了病毒。

與核酸檢測不同，新冠病毒抗體檢測顯示的是哪些人曾經被感染。抗體檢測又被稱為血清學檢測，目的是檢測血液樣本中的抗體。人體感染病毒後，會產生IgM或IgG抗體。

被感染初期，人體會迅速產生IgM抗體，以抗感染；相比之下，產生IgG抗體的速度更慢，但IgG抗體保留時間更長。抗體檢測就是檢測血清中是否有這些特異性抗體，以確定被測試者是否曾被感染。

(9)國家血清抗體檢測的方法有哪些擴展閱讀：

六種人不宜做核酸檢測

一、釆樣前30分鍾，對於有吸煙、喝酒、嚼口香糖等人群不宜做核酸檢測，以免影響檢測的准確度。

二、進食太飽的人不宜做核酸檢測，否則容易發生惡心嘔吐，影響採用結果的准確性。

三、核酸檢測前有口服抗病毒和抗感染的葯物的，應推遲做核酸檢測，避免影響檢測結果。

四、若是進行鼻拭子采樣的話，對於鼻咽部有病症的急性期，如出血、水腫等人群可以暫不予檢測。

五、剛進行核酸檢測時出現惡心嘔吐的人，應暫緩做核酸檢測，需等檢測者緩解後再予以進行。

六、被采樣者用手或其他物品觸及拭子采樣冠、棉簽的前端的不宜進行，否則容易造成污染，影響檢測結果，需更換進行重做。