黃連素抗體檢測怎麼做

① 查幽門螺桿菌怎麼檢查

檢測幽門螺桿菌：

1、非侵入性的方法：以免疫學法清中的HP抗體。已有多種方法檢測，但公認以酶聯免疫吸附試驗和免疫印跡試驗為優，優點是特異高，可接近100%，且能進行定量分析，缺點是不能鑒別既往感染及現疫病人，主要適用於流行病學調查。

尿素呼氣試驗。原理是HP在體內產生尿素酶，用13C或14C標記的尿素由受試者服下後，即分解產生帶同位素標記的二氧化碳，收集呼氣標本，用液體閃爍計數器或用氣體核素質譜儀檢測標記的二氧化碳，靈敏度極高，可定量，患者無痙，方法簡單快速，對檢測HP是否根治十分可靠。因14C有少量放射性物質，目前均用13C尿素呼氣試驗。

2、侵入性的方法：即需通過內鏡採取胃粘膜組織來檢測HP。快速尿素酶法。原理是HP具有豐富的尿素酶，分解尿素產生氨，使反應變成鹼性，由PH指示劑顯色，該法簡便，快速，靈敏，但有些細菌亦會有尿素酶，因此有假陽性可能。

細菌培養法。取胃粘膜活組織作HP培養，該法准確可靠，但培養費時。病理學檢測法。胃粘膜組織切片染色檢查，以銀染色法最佳，檢測率高，結果可靠。一般對確診HP，須兩種或兩種以上的方法均為陽性。治療後長期隨訪，連續兩次尿素呼氣試驗陰性，加上血清內抗HP抗體滴度進行性下降持續1年以上，作為治癒HP的」金標准」。

(1)黃連素抗體檢測怎麼做擴展閱讀：

預防和控制胃癌已日益引起人們的關注。研究指出，幽門螺桿菌生存於人體胃幽門部位，是最常見的細菌病原體之一。

世界有多半人口受到過幽門螺桿菌的感染，而在有些國家幾乎90%的人都感染過這種細菌。人們通常是在幼年時就受到感染，5歲以下達到50%。這種細菌感染首先引起慢性胃炎，並導致胃潰瘍和胃萎縮，嚴重者則發展為胃癌。

據統計，初次感染幽門螺桿菌年齡較早的人群萎縮性胃炎及胃癌發生率高，幽門螺桿菌感染與胃癌死亡率的高低呈現平行關系。幽門螺桿菌寄生在胃黏膜組織中，67%～80%的胃潰瘍和95%的十二指腸潰瘍是由幽門螺桿菌引起的。

慢性胃炎和消化道潰瘍患者的普遍症狀為：食後上腹部飽脹、不適或疼痛，常伴有其他不良症狀，如噯氣、腹脹、反酸和食慾減退等。有些患者還可出現反復發作性劇烈腹痛、上消化道少量出血等。據此，專家們認為，及早發現幽門螺桿菌感染者，及時而有效地用抗菌素殺滅幽門螺桿菌，對預防和控制胃癌有重大意義。

② 艾滋病抗體的檢查方法

艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測：檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法，一般要經過兩個步驟：首先做初篩試驗，如果為陽性，再做確認試驗，確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大，且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄－PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由於該法相對窗口期較長，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對簡單，整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果，而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准，但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查，因此要求操作簡便，成本低廉，而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡單，僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用，特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便，成本低廉的檢測方法，該方法結果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用，缺點是必須使用新鮮樣品，特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡便，過程短暫，整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物，以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定，分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析，且大多數為間接法及雙抗原夾心法，兩種方法各有優缺點，但都簡單而快速，數分鍾即可得出結論，不需儀器設備，操作人員不需特殊訓練，試劑穩定，適用於單份測定等。

③ 怎樣鑒別黃連素產物

用實驗室儀器吧，黃連素應該可以用氣相色譜儀檢測

④ ELISA試劑盒有幾種檢測方法

• 雙抗體夾心法

• 1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鍾。（簡稱洗滌，下同）。

• 2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

• 3.加酶標抗體：於各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定後的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

• 4.加底物液顯色：於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鍾。

• 5.終止反應：於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

• 6.結果判定：可於白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以「+」、「-」號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，於450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

• 間接法

• 1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

• 2.次日洗滌3次；

• 3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml於上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

• 4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）於反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；

• 5.37℃孵育35-60分鍾，洗滌；

• 6.』最後一遍用DDW洗滌。

• 其餘步驟同「雙抗體夾心法」的4、5、6。

⑤ 血清中禽流感抗體含量的檢測方法

禽流感是由A型流感病毒引起的一種高度接觸性傳染性疾病。給世界養禽業造成了巨大的經濟損失。禽流感病毒可分為不同的亞型，世界各地的禽流感主要由高致病性的H5和H7兩種亞型引起，而人對其中的H1和H3亞型易感。快速診斷禽流感病毒具有重大意義。目前禽流感的實驗室檢測是比較快速、准確的方法。隨著血清學實驗技術和生物工程技術的飛速發展，禽流感診斷技術的研究也不斷取得新進展。瓊脂擴散試驗、血凝和血凝抑制試驗等常規方法的使用雖有一定的優勢，但免疫熒光法和ELASA也日益顯示出其快捷准確的特點：分子生物學的發展為核酸序列分析法的建立創造了條件,也使PCR，RT－PCR及核酸探針等檢測技術成為可能。這篇文章就是對有關該病的診斷方法加以總結，並提出了認為比較可行的改進方法，旨在方便對禽流感做出及時而有效的診斷並採取相應措施。

1. 病毒的分離鑒定

無菌採集病料經處理後接種9－11日齡雞胚，收取尿囊液測定血凝活性。若為陰性則應繼續盲傳2－3代。對具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HI)試驗!以排除ND感染。然後用免疫擴散等方法來檢測特異核心抗原，核糖蛋白(NP)或基質蛋白(MP)，再用血凝抑制試驗和神經氨酸酶抑制試驗鑒定A型流感病毒亞型。分離鑒定的同時進行致病力試驗，確定毒力強弱。但是流感病毒「O」相毒株不凝集雞紅細胞，故近來在流感病毒鑒定中常用豚鼠或人紅細胞來代替。然而，該兩種細胞無細胞核，沉積慢，一般在紅細胞凝集及凝集抑制測定中需60分鍾才能觀察結果，同時在「U」型孔板中，很難沉積成像眼淚樣的點即當中常有小空[1]。

病毒的分離鑒定對禽流感的診斷比較確實,但操作程序繁瑣、費用多、耗時費力。

2. 血清學診斷技術

2.1 瓊脂擴散(AGP)試驗

進行病毒抗原型特異性鑒定即用已知陽性血清和末知抗原進行AGP試驗。

受檢樣品是具有血凝素活性的雞胚尿囊液。AGP是用來檢測A型流感病毒群特異性血清抗體，即抗核糖蛋白(RNP)和基質蛋白(MP)抗體，因而適用於鑒定流感病毒 。1979年Beard首次將AGP用於禽流感抗體檢測[2]。

此法雖簡單易行，但是敏感性較差，易出現假陽性。AGP最常用的是免疫雙擴散，趙增連、陳海燕等分別開展了禽流感病毒快速定型雙擴散法的研究，不僅提高了其敏感度，且快速省時，在此方法基礎上建立的AGP診斷技術及其診斷試劑盒，在全國范圍內得到推廣應用，並取得良好的效果。

2.2 血凝(HA)和血凝抑制試驗(HI)

一般情況下，新分離毒株要先鑒定出特異性NP或.MP抗原型(用AGP)確定禽流感病毒，再做HA亞型的鑒定[3]。

現已有人採用改進HA試驗方法，稱為HA加敏法。該法測抗體效價比常規性高2－4倍，若抗原用乙醚裂解其敏感性比常規法高4－6倍，但觀察時以30min內為好，否則易出現假陽性。另外，還應注意在HI試驗時，應先除去特異性凝集反應。許多禽類血清都含有非特異性因子，能和紅細胞表面受體競爭性地作用於病毒表面的血凝素而發生非特異性凝集反應。通常用受體破壞酶(RED)即霍亂菌培養液處理法或高碘酸鈉法制備血清[4]。

HA、HI 特異性好，是亞型鑒定的常用方法，但其操作過程繁瑣費時，並且由於用已知HA亞型的抗血清不能檢出新的HA亞型的禽流感病毒，所以用該方法鑒定不如瓊脂擴散實驗簡便和快捷。

2.3 神經氨酸酶抑制試驗(NIT)

根據A 型流感病毒的表面抗原特性,特別是血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)特性，不僅可通過HI試驗對病毒進行堅定，而且可通過NI試驗進行鑒定。1983 R.A.Van.Densen介紹了NI試驗的一種改進法－平板微量NI試驗，此法雖不能提供常量法的定量，但卻是A型流感病毒的病毒分類和抗體檢測的快捷方法， 試驗證明微量NI試驗能對分離物做出准確鑒定而常量NI試驗檢測亞型混合物似更敏感[5]。

目前國家獸醫實驗所已將微量NI試驗列為流感病毒分離物定型及篩選畜禽血清9型NA抗體的常規方法，診斷中也已廣泛採用此法特別是美國在80年代火雞發生流感病毒期間，每次流行所得的血清樣本用微量NI試驗所作出的A型流感病毒亞型鑒定結果已為病毒分離、疫苗接種和流行病學資料所證實。這種方法已被證明是快速的且成本較低和有可重復性。這種技術的可靠性將導致NI試驗的廣泛應用。

2.4 中和試驗(NT)

病毒中和實驗技術是反映機體抵抗特定病毒感染能力的最可靠方法。流感病毒中和實驗技術有以下優點：（1）由於中和抗體作用於流感病毒表面血凝素蛋白（HA），使流感病毒失去感染能力，因此，流感病毒中和實驗主要用於檢測血清中的特異性抗血凝素蛋白抗體。（2）流感病毒中和實驗既能檢測病毒株的功能性變化，又能反映機體的抗病毒水平。（3）該方法主要使用感染性病毒，不需要進行病毒或病毒蛋白的純化，因此，可以被迅速用於檢測新病毒或人群免疫狀態[6]。

以中和試驗(NT)來鑒定或滴定流感病毒時常用雞胚或組織培養細胞，操作方法與其他病毒(如NDV)的中和試驗相同。病毒中和實驗技術是一個相當復雜的過程，參與中和反應的因素有病毒、抗血清和宿主細胞。這些因素的變化都會影響中和實驗的結果。因此，對中和實驗的整個過程進行嚴格的質量控制。每次測定必須設立陽性和陰性血清對照，陽性和陰性細胞對照，以及對病毒使用劑量進行滴定。

NT試驗是最敏感而特異的血清學方法，只有抗體與病毒顆粒上的表面抗原相對應，特別是與吸咐到宿主細胞上的病毒表面抗原相對應，才能在實驗中取得滿意的顯示效果。 因此，某一個血清型的中和試驗抗體只與同組內地其他病原表現出有限的交叉反應。病毒中和試驗操作繁瑣耗時費料，臨床上幾乎不用。但作為經典方法在病毒鑒定中起著重要作用，許多新的檢測方都要與之為標准進行比較[7]。

2.5免疫熒光技術(IFT)

免疫熒光技術就是熒光抗體技術(FAT)。 IFT早在1961年就開始用於人類流感的快速診斷。1984年濱西法尼亞州爆發禽流感時，Skeeles將IFT首次用於AIV的檢測。IFT最早用於病毒的鑒定和定位病毒感染細胞中特異性抗原。主要是核內熒光:用MP抗原的熒光抗體主要出現胞質熒光，核內也有部分熒光[8]。

用於禽流感病毒的診斷常用直接熒光抗體法即在組織觸片上直接染色，以熒光顯微鏡檢查熒光 。一種AIV的熒光抗體可用來檢測不同亞型的其他病毒。

IFT用於診斷具有快速、簡便、敏感性好的特點，而且費用較低，其敏感度同病毒的分離鑒定相當，有時高於用雞胚進行的病毒分離。但是需要注意的是如何避免和降低標本中出現的假陽性(非特異性熒光)問題。

對一株雜交瘤細胞分泌的流感病毒的單克隆抗體進行檢測時，發現間接固相免疫熒光技術的敏感性比HI 高40－150倍。間接免疫熒光技術也可以用來檢測核蛋白(NP)基質蛋的(MP)抗原與抗體的反應，其敏感性很高。但對抗原制備要求較高，需用非離子型去污劑對純化的病毒粒子進行裂解[9]。

2.6 酶聯免疫吸附法(ELISA)

ELISA的基本原理是：酶結合物與相應抗體或抗原特異性結合，再遇酶底物時，在酶的強烈催化下使原來無色的底物產生化學反應，即形成有色的產物，便可用肉眼或分光光度計定量檢測其含量。該方法具有特異性、敏感性、快速性和簡易性等優點。在流感病毒微量中和實驗中，酶結合物（HRP標記的羊抗鼠IgG抗體）與存在於MDCK細胞膜上的病毒核蛋白抗原-核蛋白單克隆抗體復合物結合，HRP酶催化OPD，使無色底物形成橙黃色化合物，再由ELISA檢測儀測定吸光度值，從而獲得中和抗體滴度[11]。

1974年Jenning等首先用ELISA對注射流感病毒所產生的抗體消長規律進行了檢測。Lanbre認為ELISA的敏感性遠高於HI補給結合反應 。Meulemans(1987)對ELISA、AGP、HI檢測AIV抗體進行了比較研究。發現AGP和ELISA一樣均能檢測型特異性抗原(抗體)，但敏感性遠低於ELISA，HI適用於亞型的檢測，其敏感性不如ELISA。1993 年Shodihall用混合纖維素脂膜或硝酸纖維素膜代替微量反應板，建立了快速診斷的DAS－ELISA大大縮短了診斷時間，並可保留ELISA的特異性、敏感性，其結果又不需要特殊儀器分析、可用肉眼判定。

隨著分子生物技術的發展，中國農業科學院哈爾濱獸研所的李海燕等用表達禽流感病毒核蛋白的桿狀病毒感染S9昆蟲細胞，以其表達產物制備抗原，建立了以桿狀病毒系統表達的AIV核蛋白為抗原的禽流感間接(重組核蛋白)ELISA診斷技術(rNP－ELISA)確定了其最適工作條件，並對3138份雞血清進行了檢測。實驗證明rNP－ELISA與全病毒間接ELISA(AIV－ELISA)，AGP及HI的符合率分別為99.9%、97.8%、98.8%，並能100%檢出AGP陽性及疑似HI陽性的血清樣品。 這證明了rNP－ELISA是檢測A型禽流感病毒血清特異性抗體的一種特異、敏感、微量、快捷、經濟的血清學診斷技術[11]。

ELISA方法的敏感性和特異性與抗原的純度直接相關 。1984年Abraham等報道了抗原快速提純法，所需時間比常規法縮短10倍，並且研究結果表明應用提純抗原幾乎全部排除了假陽性反應。

目前美國Kiregard Reery和Labortories有試劑盒出售。ELISA成為AI流行病學普查及早期快速診的最有效和最實用的方法。

3 分子生物學技術

近年來，隨著現代生物技術的發展，分子生物技術已被大量應用於禽流感的快速診斷。

3.1聚合酶鏈反應(PCR)及反轉錄---聚合酶鏈反應(RT—PCR)

PCR是近來發展成熟起來的一種體外基因擴增技術，能在數小時內使DNA呈指數增加。已成功地用於多種病毒的基因檢測和分子流行病學調查等其檢測原理為：尋找傳染性因子的特異DNA序列。對待測樣品進行PCR擴增， 如果檢測出了相應的擴增帶，則判為陽性反應；反之，無擴增帶則為陰性反應。

鑒於引起致病的禽流感病毒多是H5和H9血清亞型，在PCR技術的基礎上，崔尚金等(1998)建立了一種直接檢測禽糞樣和雞胚尿囊液中AIV—H9亞型RNA的RT－PCR反應，並將此法與AGP和電鏡技術作了比較，結果表明引物的特異性決定了產物的特異性，並且該方法靈敏度高，檢測過程僅需8h左右，並且大大縮短了感染後的檢出時間。

應用毛細管PCR(15min30個循環)代替常規PCR(2.5個小時30個循環)以進一步縮短檢測時間的研究也已展開並進入更深入的領域，以期用於不同樣品(組織、組織液、分泌液、糞便等)的檢測，區分高致病力毒株和低致病力毒株與非致病力毒株，從而深入探討該方法在AIV的臨床早期診斷，流行病學調查及發病機制中的應用價值，為我國制定AIV的綜合防制措施做出貢獻[12]。

3.2 核酸探針技術/核酸分子雜交技術

這項技術是目前生物化學和分子生物學研究應用最廣泛的技術之一，是定性和定量檢測特異DNA或RNA的有力工具。

核酸探針技術的原理，在進行雜交時，用一種預先分離純化的已知DNA或RNA序列片段去檢測末知的核酸樣品，對作檢測用的已知DNA或RNA序列片段加以標記的片段就稱為核酸探針。作為核酸探針的DNA或RNA是各種病原微生物基因的一部分。 在變性分開的待檢DNA或RNA單鏈中加入與其有互補作用的核酸探針。探針在一定條件下就能與原來變性分開的DNA或RNA單鏈上的互補區段形成氫鍵，從而結合成雜交雙鏈，通過洗滌，除去未雜交上的標記物，然後進行放射自顯影，即可確定原待檢樣品有無與探針互補的DNA或RNA序列。

Bashiruddin等(1991)報道了擴增HA基因來分析致病毒株與非致病毒株的差異，證實了致病毒株與非致病毒株氨基酸的差異，顯示了本方法的應用前景[13]。

3.3熒光PCR法

利用生物學手段，用熒光PCR方法快速檢測禽流感病毒的方法已在北京通過專家鑒定，這一研究成果不僅在國內屬於首次，而且在國際上也屬於先進水平。它與國際標准方法雞胚病毒分離相比，不僅無需做雞胚病毒分離培養，而且時間也由原來最短的21d縮短為4h。

4 電鏡技術

由於流感病毒為正粘病毒，屬於形態特徵性強的病毒,因而可用電鏡技術來診斷。為提高禽流感的檢出率，除樣品制備技術外，取病料的部位和時間也是獲得准確檢驗結果的關鍵。病料的採集部位及取材時間應根據禽流感病毒在動物體內分布特徵及其感染特性而定[15]。

5 流感實驗室檢測中應注意的若干問題（高致病性流感病毒）

（1）禁止在同一實驗室，更不應在同一接種櫃中，同時處理接種未知臨床標本、已知陽性標本

（2）禁止在同一實驗室，同一時間處理，接種采自不同動物的標本；動物標本（如禽、豬等）必須與人的標本分別保存。

（3）接種後剩餘原始標本，尤其分離出病毒的標本需暫時凍存，有條件的應置-70℃或以下保存，以便需要時可進行復查，待分離物經國家流感中心鑒定完後方可處理掉。分離陰性的標本應隨時棄之。

（4）嚴禁實驗室交叉污染：在病毒分離時嚴禁設陽性對照及操作在人群中已消失的流感病毒。

（5）向國家流感中心送毒株時，量至少需5 ml，同時需自己保存一些，以便寄送過程發生意外時可繼續補送。

（6）流感病毒在-20℃～-40℃ 時不穩定，故不宜在此溫度下長期保存。

（7）雞胚中分離出的流感病毒，應盡量別在MDCK細胞上傳代。因當今國內所用的MDCK細胞屬腫瘤細胞系，一旦病毒通過它傳代就無法用於疫苗制備。

（8）寄送毒株時一定需附上送檢表。寄送毒株需及時，尤其鑒定不出的，異常的毒株應盡快向國家流感中心寄送。寄送時用快速直送國家流感中心[16]。

總結

使用常規方法檢測禽流感及其抗體仍是目前世界上普遍接受的方法。這些方法包括病毒的分離、瓊脂擴散實驗鑒定病毒和測定特異性的血清抗體，血細胞凝集及其抑制試驗鑒定病毒或血清抗體亞型。 採用雞胚中和試驗來鑒定病毒或血清抗體亞型也是一種可以接受的方法，但相對血凝抑制試驗較為麻煩。隨著科學技術的發展，檢測該病毒和血清的方法出現了免疫光法和ELISA法，這些方都有快捷的特點，特別是日益完善並趨向成熟的ELISA檢測方法,因其簡捷、敏感、特異性強等優點而越來越得到廣泛的重視和應用。隨著分子生物學的發展，核酸序列分析法越來越可能成為一種更准確可行的方法,特別是它能從分子生物學的發展，核酸序列分析法越來越可能成為一種更准確可行的方法，特別是它能從分子水平揭示HPAIV甚至潛在HPAIV毒株。這種方法雖然在一般實驗室還不能應用,但RT－PCR技術為從基因水平檢測禽流感病毒RNA提供了靈敏、特異和快捷准確的方法。正在進行的應用毛細管PCR代替常規PCR，以進一步縮短檢測時間的研究和根據禽流感NP的高度保守性而建立的rNP－ELISA檢測法，不僅具有與AGP、HI同樣的特異性，而且具有更高的靈敏性，可在微克水平上進行檢測!都是很有前途的方法。將rNP－ELISA檢測技術及其成套的成品試劑組裝成診斷試劑盒，也取得了很好的實驗效果。

在以上各種檢測方法及科學技術發展的基礎上，將PCR技術與ELISA技術結合起來，建立一種新的實驗室檢測AIV的方法，將有較大的研究價值其實。其實驗原理（以此類方法中最簡單的雙引物雙標記法為例）如下：

PCR的一對引物中!其中一種引物用生物素標記，另一種引物用地高辛標記，酶標微孔板上用生物素的親和素包被(生物素的親和素與生物素特異的結合)。PCR擴增後純化片段加入微孔板中。此時，微孔板上包被的生物素親和素將與引物上的生物素結合而捕捉了PCR片段，再在微孔板中加入辣根過氧化物酶標記的抗地高辛抗體，該抗體將與另一引物上的地高辛結合，從而形成生物素親和素－生物素－PCR片段地－高辛－抗地高辛－酶的復合物。加入酶的相應底物進行顯色，便可判斷PCR擴增的有無。由於該方法是PCR技術和ELISA技術的結合，所以它是一種兩級放大系統,即PCR放大和ELISA放大。故而它的靈敏度更高，同時這種方法避免了PCR產物分析時的電極及染色過程，所以更為快捷、簡便、靈敏。

⑥ 幽門螺桿菌抗體測定是怎麼檢測的

檢測幽門螺桿菌，目前醫院有3中做法：1.抽血化驗，較少應用。2.呼氣試驗, 只要吹氣就可以；3.電子胃鏡，這個最准確，相對來說比較痛苦。建議先做呼氣，測試是否有幽門螺桿菌，如果結果是PH嚴重，就建議還是做胃鏡吧，它不僅僅可以知道幽門螺桿菌感染程度，還能知道胃病的病變程度，比如是胃部糜爛，或潰瘍，或穿孔等。

⑦ 用什麼方法可以檢測抗體是否與蛋白質起作用，並設計實驗用該抗體純化該蛋白

檢測目的基因是否進入到受體細胞的方法，一般包括分子水平檢測和個體水平檢測。其中分子檢測有3個層次：1目的基因是否整合到受體細胞染色體dna上，2目的基因是否轉錄出mrna，3目的基因是否翻譯出蛋白質。1和2都可以用dna分子雜交技術檢測，3可以用抗體-抗原的方法檢測。個體水平的檢測包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否具有抗性及抗性的程度；基因工程產品需要與天然產品的功能進行活性比較等。

⑧ 我是做ELISA實驗的初學者，最近在建立雙抗體夾心法的檢測方法，不知道如何確定包被濃度和抗原濃度，謝謝！

你是不知道包被的濃度還是不知道怎樣配治包被液啊？
我這里有份ELISA的實驗過程。不過是除掉前兩部的。
1、 加被檢抗原（重組蛋白或自然樣品）：用稀釋液（DS01、AS01、AS02、AS03、AS04）將被檢抗原按實驗設計稀釋，每孔100µl，同時用稀釋液作空白對照。封板膜封板，室溫放置兩小時。

2、 洗滌：到盡板孔中的液體，加滿洗滌液（WS03），靜止放十秒，洗四次，最後在毛巾或吸水紙上拍干板子：

3、 加檢測抗體：將生物素標記的檢測抗體稀釋適當濃度（稀釋液DS01），每孔100 µl封板膜封板，室溫放置一小時：

4、 洗滌：到盡板孔中的液體，加滿洗滌液（WS03），靜止放十秒，洗四次，最後在毛巾或吸水紙上拍干板子：

5、 加親和素-辣根過氧化酶（HRP）稀釋適當濃度（稀釋液HD01）每孔100µl，封板膜封板，室溫放置30分鍾：

6、 加底物：新鮮配製的四甲基聯苯胺溶液（TMB），每孔100µl，室溫暗處放置30分鍾：

7、 加終止液（SS01）：每孔100µl，立即讀值：

8、 觀察結果：用酶標儀記錄450nm讀數.

⑨ ELISA檢測方法的原理及其優缺點是什麼

1.
直接法（direct
elisa）
將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
優勢：操作手續簡略，因無須運用二抗可防止交互反響。
缺陷：實驗中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費用相對進步。
2.間接法（indirect
elisa）
此測定辦法與直接法相似，不一樣在於一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優勢：二抗能夠加強信號，並且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它最多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發作的機率較高。
3.雙抗體夾心法（sandwich
elisa）
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其間一個抗體將抗原固定於固相載體上，即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶符號後直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇，才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯系部位。
優勢：高活絡、高專一性，抗原無須事前純化。
缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體聯系部位。
4.競爭法（competitive
elisa）
樣本里的抗原（自在抗原）和純化並固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一同競爭一樣的抗體，當樣品里的自在抗原越多，就能夠聯系越多的抗體，而固定抗原就只能聯繫到較少的抗體，反之亦然。經清潔過程，洗去自在抗原和抗體的復合物，只留下固定抗原和抗體的復合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬，依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。
優勢：可適用比擬不純的樣本，並且數據再現性很高。
缺陷：全體的敏感性和專一性都較差。
bim試劑盒為您提供！

⑩ 飼料廠怎麼檢測黃麴黴毒素上台設備多少錢檢測一次樣品成本多少錢越詳細越好

如果有自己的檢測室的話再買點檢測試劑盒的，是不貴的，也就千把塊錢的，這個是我看到的一家做食品檢測試劑的網站上的關於
黃麴黴毒素B1酶聯免疫試劑盒
黃麴黴毒素是一類真菌（如黃麴黴和寄生麴黴）的有毒的代謝產物，它們具有很強的致癌性，主要存在於穀物、堅果、棉籽以及一些和人類血液，動物飼料相關的產品中。其中黃麴黴毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染頻率均居於首位。薄層色譜一直是檢測黃麴黴毒素常用的方法，但此方法制備樣品及分析樣品時費時又費力。而使用黃麴黴毒素B1 ELISA試劑盒則能夠快速而准確的分析樣品中黃麴黴毒素B1殘留。本試劑盒是應用ELISA技術研發的新一代真菌毒素檢測產品，操作時間短 於60min，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。下面的額是檢測方法，檢測限靈敏度之類的
三方3方元的那家做食品檢測試劑的檢測原理

本試劑盒是利用競爭ELISA方法，在酶標板微孔上預包被羊抗鼠抗體。檢測時，加入黃麴黴毒素Bl抗體孵育，它與包被的羊抗鼠抗體結合，洗板後加入標准品或樣品溶液及黃麴黴毒素Bl酶結合物，他們競爭性地與黃麴黴毒素Bl抗體結合，形成抗原抗體復合物；用TMB底物顯色；加入反應終止液後在450nm波長酶標儀下進行檢測，樣品中的黃麴黴毒素Bl濃度與吸光度成反比。

詳細技術指標：

樣品檢測限：

飼料------------------------------2.5μg/kg
麩皮、玉米皮------------------5μg/kg
回收率----------------------------85%±10%
精密度-----------試劑盒的變異系數均小於10%
在要不然你直接打第三方檢測的電話，更直接把