⑴ HIV的檢測步驟有哪些
目前艾滋檢測方法很多,步驟也不同。可以到醫院或疾控免費檢測,也可在家自測唾液收集器天貓檢測項目的樣品種類
1. HIV 抗體檢測:全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。
2. HIV 抗原檢測:全血、血清、血漿、病毒培養上清液。
3. T 淋巴細胞亞群測定:EDTA 或肝素抗凝全血。
4. HIV-1 病毒載量、基因型、耐葯檢測:血漿、濾紙干血斑(DBS)。
5. HIV 核酸定性與定量、基因型檢測和 HIV-1 分離培養:淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞(PBMC)及全血。
當然,實驗室最常用的仍然是血液標本,其他只作為補充樣本。
HIV 抗體檢測
HIV 抗體檢測是艾滋病實驗室檢測的優先選擇項目,在國內絕大多數初篩實驗室應用最廣泛。
1. 初篩方法
(1)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
ELISA 法檢測 HIV 抗體是 HIV 初篩實驗室最常用最普遍的方法,目前檢測試劑已經發展到第四代,即同時檢測血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗體,秉承「寧可錯殺一千,不可漏網一個」的革命精神,其靈敏度遠高於特異性,直叫 HIV 抗體無處遁形。
(2)化學發光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)
這個試驗方法是近 10 年迅猛發展的一種新型檢測方法,其採用發光或熒光底物,既可檢測抗體,也可聯合檢測抗原抗體,用發光或熒光儀測定結果,其靈敏度較 ELISA 有了進一步的提高,同時帶來的是檢測成本的增加和假陽性率的增高。
(3)快速檢測(RT)方法
此類方法操作簡便快速,適用於應急檢測、門診急診檢測,但靈敏度和特異性遠不如 ELISA 和發光法,但是經濟實惠,也有一定的市場影響力。主要包括以下幾種方法:明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗。
2. 確認實驗
(1)免疫印跡試驗(WB)
WB 採用間接法檢測樣品中的抗 HIV-1/HIV-2 特異性抗體。採用聚丙烯醯胺凝膠電泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分離開來,經過一系列處理後,硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結合的抗體條帶,從而確診抗體的存在。
(2)條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)
實驗原理基本同 WB 法,不再贅述。
HIV-1 抗原檢測
1. 篩查實驗
(1)酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法):即第四代抗原抗體聯合檢測試劑盒。抗體包被固相反應孔(管)的底部,待測樣本中 P24 抗原與包被抗體形成抗原抗體復合物,再加入酶(HRP)標記的 HIV-1 抗體與抗原結合,加底物顯色,在酶標儀上讀取結果。因同時檢測抗原抗體,靈敏度大大提高,有效縮短了 HIV 感染的檢測窗口期,但因試劑成本較高,在普通篩查實驗室推廣有一定難度。
(2)酶聯熒光分析法(ELFA):待測樣品的 p24 抗原與包被在固相孔(管)內的 p24 抗體結合,並被生物素標記的 p24 抗體識別。臨床實驗室應用前景不明朗,需要熒光檢測設備,成本較高。
(3)電化學發光法(ECLIA):待測樣品的 p24 抗原與包被抗體的磁性微粒和發光劑標記的抗體在反應管中溫育,形成磁性微珠包被抗體-抗原-發光劑標記抗體復合物。
(4)抗原抗體快速檢測法:同快速方法(RT)檢測抗體,不同之處是用 HIV 抗體包被載體,檢測靈敏度同樣較差。
2. 中和試驗
中和試驗主要是 p24 抗原檢測的補充試驗,還可做 HIV-1RNA 的定性或定量檢測,以排除篩查試驗的假陽性。
(1)酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法):待檢樣品先與中和劑(p24 抗原的抗體)共同孵育,如果樣品中存在 p24 抗原,中和抗體將與之結合形成復合物,而不能與固相載體上的捕獲抗體結合。
(2)酶聯熒光分析法(ELFA):原理和檢測步驟同上述酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法),中和率 ≥ 60 %,認為樣品中的 p24 抗原是真陽性。
(3)電化學發光法 (ECLIA):原理和檢測步驟同上述酶聯免疫吸附實驗(ELISA 法),中和率大於 50%,認為樣品中的 p24 抗原是真陽性。
HIV 核酸檢測
目前國內 HIV 核酸檢測試劑主要為 Taqman 實時熒光 PCR 檢測試劑,可檢測血漿、血清、組織器官或血液製品的 HIV-1RNA 和 DNA,DBS 可用於檢測 RNA/DNA。全球目前正式用於臨床診斷 HIV-1 急性期感染的核酸檢測試劑比較少,主要是美國 FDA 批準的 Gen-Probe 公司生產的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性檢測試劑和歐盟批準的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性檢測試劑。
臨床診斷相關的檢測策略及結果報告
HIV 檢測陽性結果的檢測過程一般經歷兩個階段,初篩和復檢程序。以 HIV 抗體檢測為例,具體流程如下:
試劑 1 進行初篩,結果無反應,報告「HIV 抗體陰性」;結果有反應,不能出具陽性報告,必須進入復檢試驗。對初篩有反應的樣品,用原有試劑雙份或雙孔進行復檢試驗(或者兩種試劑復檢),如均無反應,報告「HIV 抗體陰性」;如均有反應或一個有反應一個無反應,進行補充試驗(抗體確證試驗和 HIV-1 核酸試驗),報告 HIV 感染待確定。
⑵ 誰能告訴我中和抗體和抗體的區別
主要區別是,性質不同、性能不同、應用不同,具體如下:
一、性質不同
1、中和抗體
中和抗體是由適應性免疫應答細胞分泌的一種可溶性蛋白。
2、抗體
抗體是一類能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。
二、性能不同
1、中和抗體
病原微生物入侵細胞時需要依賴病原體自身表達的特定分子與細胞上的受體結合,才能感染細胞,並進一步擴增。中和抗體是B淋巴細胞產生的某些抗體,能夠與病原微生物表面的抗原結合,從而阻止該病原微生物黏附靶細胞受體,防止侵入細胞。
2、抗體
是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌,被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質,僅被發現存在於脊椎動物的血液等體液中,及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個獨特特徵,該外來目標被稱為抗原。
三、應用不同
1、中和抗體
由於中和抗體是在病毒進入細胞之前破壞病毒的,所以,如果在接觸HIV病毒之前體內就有抗體的話,就能夠預防HIV感染。現有的疫苗如麻疹疫苗、脊髓灰質炎疫苗、乙肝疫苗、甲肝疫苗,都是使接種者產生中和抗體以抵禦病毒的。
2、抗體
抗體在醫療實踐中應用甚為廣泛。如用於疾病的預防、診斷和治療方面都有一定的作用。臨床上用丙種球蛋白預防病毒性肝炎、麻疹、風疹等,國際上用抗Rh免疫球蛋白預防因Rh血型不合引起的溶血症。診斷上如類風濕因子用於類風濕性關節炎,抗核抗體(ANA)、抗DNA抗體用於系統性紅斑狼瘡,抗精子抗體用於原發性不孕症的診斷等,治療上如毒素中毒用抗毒治療以及免疫缺陷性疾病的治療等。
⑶ 中和抗體的介紹
中和抗體是當病原微生物侵入機體時會產生相應的抗體。病原微生物入侵細胞時需要依賴病原體自身表達的特定分子與細胞上的受體結合,才能感染細胞,並進一步擴增。中和抗體是B淋巴細胞產生的某些抗體,能夠與病原微生物表面的抗原結合,從而阻止該病原微生物黏附靶細胞受體,防止侵入細胞。
⑷ 大規模抗體檢測有什麼意義
3月25日,德國著名病毒學家德羅斯滕教授發表講話稱,感染新冠病毒後的病人會形成抗體,其中一部分無症狀感染者可能在自己毫不察覺的情況下獲得免疫,未來可以通過大規模抗體檢測,核實這部分數據,這對整個疫情發展的建模和對未來的預測有非常重要的意義。
關於抗體,一個很重要的概念是滴定度,它反映的是抗體結合抗原特異性位點的最低濃度。我們不斷稀釋血清,直到最後抗體和血清樣本不再呈現陽性,這個最低濃度即滴定度被用來表示抗體的數量。機體受到攻擊時,可以產生很多抗體,對病毒起作用的抗體,我們稱之為中和抗體。
通過中和實驗檢測,我們能知道中和抗體的滴定度。在一定數量抗體里,可能有很多的中和抗體,也可能只有很少的中和抗體。如果中和抗體多,當然對於抵禦病毒非常有利。精確的了解免疫系統有多少中和抗體對於疫苗的開發以及檢測非常重要。
(4)中和抗體檢測與什麼結合擴展閱讀:
日本市民:希望自己的數據能對社會有幫助
東京都啟動檢測前,在板橋區內,受委託的結核預防會(位於東京)護士戴著防護面罩、口罩和手套介紹了采血的情景。流程與體檢采血一樣,1~2分鍾內完成。協會負責人表示:「我認為通過了解感染的實際情況,將有助於今後的政策。」
在宮城縣名取市的檢測地點,縣結核預防會的護士等人對隨機抽選的居民實施采血。家住該市的打工男性(69歲)表示:「疫情擴大期完全沒有出現身體不舒服的情況,但想進行查看。希望自己的數據能對社會有幫助。」
東京都福祉保健局體制支援擔當部長田中愛子說:「抗體檢測對制定今後的防疫對策也是十分重要的,請收到檢測通知的人務必前來檢測。」
⑸ 什麼是抗原進化和中和抗體的關系
能夠刺激機體產生免疫反應,並能受免疫反應排斥的物質叫抗原.機體受外來抗原物質刺激後,能產生一種與該抗原發生特異性結合的物質,稱為抗體.
⑹ 什麼樣的抗體需要做中和活性分析
1、通過ELISA技術檢測到叫total binding antibody,即結合抗體;
而中和抗體的檢測一般都要用到細胞培養和對應的病毒或者細菌等病毒體,通過觀察樣品對該種病原體感染宿主細胞的抑制情況而測定出來的,即中和抗體效價。
中和抗體肯定具有結合抗體的性質,但結合抗體不一定具有中和活性。
2、對人體疾病而言,按照經典且目前行之有效的疫苗和免疫學角度看,中和抗體對預防這類疾病更有效。
但很多資料也表明,可能那些non-neutralizing但具有其他作用的功能性抗體在控制和預防感染性疾病中也發揮著十分重要的作用,例如補體作用,ADCC,ADCVI等等。
⑺ 病毒鑒定常用方法有哪些
寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應,目前主要採用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時,對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。
開展寨卡病毒實驗室檢測時,應同時考慮登革病毒和基孔肯亞病毒感染可能。登革病毒和基孔肯亞病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
(一)臨床標本檢測。
1.病原學檢測
病原學檢測主要適用於急性期血液標本,一般認為發病7天內檢測陽性率高。
(1)核酸檢測:採用熒光定量RT-PCR方法,是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
(2)病毒分離:將標本接種於蚊源細胞(C6/36)或哺乳動物細胞(BHK21、Vero)進行分離培養,出現病變以後,用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2.血清學檢測
(1)血清特異性IgM抗體:發病3天後可檢出病毒特異性IgM抗體,但發病7天後檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性,提示患者可能新近感染寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應,易於產生假陽性。
(2)中和抗體:採用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染,可以確診。
(二)媒介標本檢測。
1.標本處理
將分類後的伊蚊成蚊或幼蟲,按照採集地點,每10~20隻為一份進行研磨處理。
2.病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測
3.病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。
⑻ 中和抗體水平與ELISA抗體水平的區別
1、通過ELISA技術檢測到叫total binding antibody,即結合抗體;而中和抗體的檢測一般都要用到細胞培養和對應的病毒或者細菌等病毒體,通過觀察樣品對該種病原體感染宿主細胞的抑制情況而測定出來的,即中和抗體效價。中和抗體肯定具有結合抗體的性質,但結合抗體不一定具有中和活性。
2、對人體疾病而言,按照經典且目前行之有效的疫苗和免疫學角度看,中和抗體對預防這類疾病更有效。但很多資料也表明,可能那些non-neutralizing但具有其他作用的功能性抗體在控制和預防感染性疾病中也發揮著十分重要的作用,例如補體作用,ADCC,ADCVI等等。